Etude de la prophenoloxydase chez anopheles gambiae
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Paris 6Disciplines:
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La cascade prophenoloxydase joue un role important dans l'immunite chez les invertebres. Elle est impliquee dans l'encapsulation et la sequestration des parasites et particules etrangeres, et dans la distinction entre le soi et le non soi. La phenoloxydase est une enzyme cle de la voie de synthese de la melanine, le substrat depose autour des particules pour les sequestrer. L'utilisation d'un anticorps polyclonal dirige contre la prophenoloxydase du ver a soie bombyx mori, nous a permis de mettre en evidence la presence de deux bandes proteiques qui croisent avec l'anticorps au niveau des glandes salivaires d'anopheles gambiae, principal vecteur du paludisme en afrique subsaharienne. La premiere, d'environ 80 kda, deja identifiee dans l'hemolymphe de l'insecte, possede une activite catechol oxydase. La deuxieme, de 65 kda, est la seule decelable au niveau du mesenteron de l'insecte et n'a pas pu etre identifiee dans l'hemolymphe de l'insecte. Nous n'avons pas pu mettre en evidence d'activite catechol oxydase. L'adnc codant pour la proteine de 80 kda a ete isole d'une banque de nymphes de la souche g3. Ce messager de 2,5 kb code pour une proteine de 80 kda possedant deux sites de fixation du cuivre comme toutes les prophenoloxydases et les hemocyanines des invertebres, et deux sites potentiels de n-glycosylation. Le gene qui code pour cette proteine est localise sur le bras droit du chromosome n 2, dans la division 13, region b. Il s'etale sur une region de 10 kb, et code pour un transcrit primaire d'environ 8 kb (7600 pb). Il est constitue de 5 exons separes entre eux par 4 introns, dont deux grands (intron i et intron iii) et deux petits (intron ii et intron iv). La region du promoteur presente un certain nombre de motifs candidats a la regulation genique dont, a part le tata box, on identifie le cat box, 2 motifs nf-b et un motif ctggga presents dans les promoteurs des genes de la phase aigue, une sequence palindromique tggaatgttcca, 3 motifs isre dont ggaaaaagaaacg, gaaacc et gaaatggca, 5 motifs tggca et deux motifs aggtca. Ce gene exprime moderement de facon constitutive a tous les stades de vie de l'insecte est hautement induit par le repas de sang et la fecondation de l'oeuf. Enfin, une grande concentration de cette proteine est observee dans les stades du developpement larvaire et nymphal jusqu'a 24 heures apres l'emergence de l'insecte adulte.