Abstract FR:

Les champignons filamenteux sont capables de degrader la cafeine contenue dans la pulpe de cafe ou dans des milieux entierement synthetiques. Les enzymes impliquees dans cette degradation n'ont jamais ete caracterisees a l'etat pur chez les champignons filamenteux. Notre objectif etait de purifier une enzyme impliquee dans la degradation de la cafeine afin de la caracteriser. Sur 20 souches de champignons filamenteux testees, 3 aspergillus et 4 penicillium commune ont ete capables de degrader la cafeine d'un milieu liquide ne contenant pas d'autre source d'azote. Ces 7 souches degradent la cafeine en theophylline, puis en 3-methylxanthine par des reactions de demethylation successives. Elles sont aussi capables d'utiliser la theophylline, la theobromine et la paraxanthine comme seule source d'azote. Une des souches les plus performantes, aspergillus tamarii, a ete cultivee sur 2 supports solides impregnes d'une solution nutritive. Pour les deux types de supports solides utilises les produits de degradation obtenus sont la theophylline et la 3-methylxanthine. L'ajout de sources simples d'azote (sulfate d'ammonium, uree) aux milieux de culture, inhibe la degradation de la cafeine qui debute lorsque les sources simples d'azote sont epuisees et si la source de carbone est toujours disponible dans le milieu de culture. Les activites cafeine et theophylline demethylases ont ete comparees in vitro dans un extrait brut cytoplasmique d'a. Tamarii obtenu a partir de cultures liquides. L'activite theophylline demethylase a ete caracterisee a partir d'un extrait brut. La theophylline demethylase a ete purifiee jusqu'a homogeneite electrophoretique. C'est une proteine monomerique, de poids moleculaire de 40 a 43 kda, ayant un point isoelectrique compris entre 5,2 et 5,8. La sequence n-terminale et 5 sequences internes de la thd ont ete determinees. Ces dernieres presentent une homologie de sequence avec des proteines de la famille des nmt1.