Abstract FR:

L'objectif de cette etude a reside dans la determination des caracteristiques moleculaires de l'interaction de deux complexes anticorps/proteine, afin de modifier les proprietes de liaison de ces anticorps, et de developper de nouveaux outils diagnostiques ou therapeutiques. Les modeles etudies, les anticorps monoclonaux m-alpha-deux-trois et mst-deux, sont tous deux specifiques de familles de ligands cholinergiques, respectivement les neurotoxines courtes et longues de serpents, et ils constituent des mimes moleculaires partiels du recepteur nicotinique de l'acetylcholine. Le travail presente est organise en trois parties. La premiere a consiste a produire dans un systeme recombinant bacterien des fragments de ces anticorps (fab et scfv) fusionnes a la phosphatase alcaline d'e. Coli, et a caracteriser leurs proprietes fonctionnelles. Nous avons montre que ces fragments etaient capables de reconnaitre specifiquement leurs antigenes respectifs. La seconde partie a ete consacree a l'identification des surfaces d'interaction de ces anticorps. L'etude de l'interaction m-alpha-deux-trois/toxine a ete privilegiee, l'epitope de la toxine reconnu par cet anticorps ayant ete prealablement determine. Ainsi, combinant la modelisation moleculaire et l'analyse mutationnelle, nous avons identifie la paratope fonctionnel du m-alpha-deux-trois. Puis, utilisant des doubles mutants (anticorps/toxine), nous avons montre que l'acide aspartique trente et un du cdr un h de l'anticorps interagissait avec l'arginine trente trois de la toxine erabutoxine a. L'ensemble de ces donnees nous a permis de construire des modeles de complexe m-alpha-deux-trois/toxine, dont les caracteristiques structurales sont convergentes. Ces resultats permettent de poser les bases moleculaires de l'interaction entre un anticorps, mime moleculaire partiel d'un recepteur, et une toxine. Dans la troisieme partie, nous avons cherche a elargir les proprietes de liaison du m-alpha-deux-trois et du mst-deux, a partir de banques qui ont consiste a modifier de maniere aleatoire certaines regions de ces anticorps, et en utilisant la technique d'expression d'anticorps a la surface de bacteriophages.