Abstract FR:

La structure tridimensionnelle d'une cutinase recombinante de fusarium solani pisi a ete determinee par cristallographie aux rayons-x a la resolution de 1,6 angstroems. L'utilisation de la mutagenese dirigee a permis de resoudre le probleme pose par la recherche de derives d'atomes lourds. A partir de l'enzyme recombinee dans e. Coli, quatre mutants serine/cysteine ont conduit a des derives mercure permettant le calcul d'une carte m. I. R. A 3 angstroems de resolution (fom=0,77). Le modele construit en densite a ete affine par recuit simule a l'aide d'x-plor dans la gamme de resolution de 6 a 1,6 angstroems (r=0,154 pour 18 867 reflexions). Il se compose de 196 residus et 190 molecules d'eau. La cutinase est une proteine de type alpha/beta comportant un feuillet-beta central commun aux esterases a serine. L'analyse de la structure permet d'apporter des elements nouveaux a la connaissance du mecanisme catalytique des enzymes lipolytiques. Celles-ci ont la particularite de voir leur activite multipliee aux interfaces lipides/eau. La cutinase, possede une activite sur les esters en solution et poursuit cette hydrolyse au-dessus de la concentration micellaire critique pour les esters amphiphiles sans manifester d'activation interfaciale. Contrairement aux lipases, le site actif de la cutinase n'est pas recouvert par un volet hydrophobe masquant la serine catalytique. Cette difference structurale est fondamentale car elle permet de valider en partie l'importance de cette boucle hydrophobe dans le phenomene d'activation interfaciale propre aux enzymes lipolytiques