Abstract FR:

La forte permeabilite hydrique de certaines membranes est depuis longtemps attribuee a la presence de proteines specialisees dans la diffusion facilitee de l'eau. Ces proteines sont aujourd'hui identifiees, ce sont les aquaporines. Depuis leur decouverte, de nombreux travaux ont ete entrepris pour comprendre leur fonction, leur structure, leur selectivite, leur adressage et leur regulation, et l'utilisation de systemes d'expression heterologues s'est averee utile, bien que limitee par l'impossibilite d'obtenir des proteines en quantite importante. Nous avons mis au point un systeme integre permettant a la fois les etudes fonctionnelles et la production de proteine en quantite importante, il s'agit du mutant ny17 de la levure saccharomyces cerevisiae. Nous presentons dans ce travail la mise au point de ce systeme avec l'aquaporine-1 humaine (h-aqp1). Nous montrons que la proteine exprimee dans la levure garde son activite de canal hydrique, puis nous immuno-purifions h-aqp1 etiquetee en quantite compatible avec des etudes biochimiques. La reconstitution dans des liposomes de h-aqp1 purifiee nous permet de montrer que la proteine etiquetee reste fonctionnelle. Nous avons donc entre les mains, un systeme fiable et efficace qui permettra l'etude des relations structure-fonction de nombreuses aquaporines et de leurs mutants. Cependant, l'analyse du genome de s. Cerevisiae a revele en 1995 la probable presence d'aquaporines endogenes susceptibles de rendre delicate l'utilisation de notre systeme. Nous avons clone et sequence l'adnc de 2 genes et caracterise fonctionnellement leur proteine dans l'ovocyte de xenope. Nous montrons qu'il existe des aquaporines fonctionnelles dans certaines souches de s. Cerevisiae, mais qu'apparemment aucune n'est presente dans la souche ny17. Si notre systeme reste donc tout a fait valable pour l'etude d'aquaporines exogenes, il pose le probleme du role joue par les aquaporines endogenes dans la vie et le cycle cellulaire de la levure.