Abstract FR:

Les lignines, dont l'apparition a ete determinante dans la colonisation du milieu terrestre par les vegetaux il y a 450 millions d'annees, resultent de la polymerisation de trois unites de base ou monolignols. Si la voie metabolique conduisant aux monolignols est globalement connue, la nature des enzymes responsables de leur polymerisation oxydative, donc de la biosynthese des lignines, est, en revanche, toujours l'objet d'une controverse. Nous avons identifie deux laccases (90 et 110 kda), ioniquement liees aux parois des cellules du jeune xyleme de peuplier, capables de polymeriser les monolignols in vitro. Celle de 90 kda a ete purifiee et caracterisee du point de vue structural et fonctionnel (pl, glycosylation, specificite de substrat, inhibiteurs, ). C'est, a notre connaissance du moins, la premiere laccase vegetale purifiee a homogeneite a partir d'un tissu en cours de lignification, chez un angiosperme. Une approche pcr a permis d'isoler, les clones adnc correspondants aux laccases de 90 et de 110 kda (lac90 et lac110). En parallele, le criblage heterologue de la meme banque d'adnc a permis d'obtenir trois clones d'adnc supplementaires differents (lac1, lac2 et lac3). Il existe donc au moins cinq genes differents de laccase qui s'expriment dans le xyleme de peuplier. Les cinq clones correspondent a une famille multigenique tres divergente. L'analyse de leur expression (northern, rt-pcr) a montre que ces genes s'expriment abondamment dans les tiges et un peu moins dans les feuilles et les racines. Afin de preciser le role de ces differentes laccases, des peupliers sous-exprimant lac1, lac2, lac90 ou lac110 ont ete obtenus par strategie antisens. L'analyse des lignines de ces differents peupliers n'a revele aucune difference tant au plan quantitatif qu'au plan qualitatif, ce qui laisse penser qu'aucune des laccases etudiees n'est seule responsable de la biosynthese des lignines.