Abstract FR:

La synthese et la secretion de la cytotoxine hlya chez e. Coli sont controlees par quatre genes, hlycabd, organises en operon, hlya est active par le produit du gene hlyc, contient un signal de secretion c-terminal et est secretee directement vers le milieu externe selon un mecanisme sec-independant mais dependant d'un complexe de translocation forme par les proteines membranaires hlyb et hlyd, et par la proteine endogene tolc. Des anticorps obtenus contre la proteine hlyd2001, ont permis de la localiser in vivo dans membrane interne et dans les fractions de densites intermediaires. J'ai montre que la stabilisation de la localisation de hlyd dans la membrane interne d'e. Coli est dependante de hlyb et tolc, et que les deux regions structurees en coiled-coil, situees dans le domaine periplasmique de la proteine, seraient necessaires pour l'oligomerisation des unites de hlyd et la formation du canal trans-enveloppe de secretion. Quatorze mutants hlyd ont ete obtenus et analyses pour leur phenotype de secretion, la localisation de hlyd mutees et leur capacite a interagir avec hlya. La fonctionnalite des canaux formes par ces translocateurs mutants a ete analysee par leur capacite a rendre e. Coli sensible a deux antibiotiques, la vancomycine et l'acide fusidique, normalement actifs seulement contre les bacteries gram-positives. Trois domaines de hlyd ont ete definis comme etant impliques dans differentes etapes de la secretion de hlya: l'initiation, la translocation et le repliement/relargage dans le milieu. Il a ete montre que l'etape tardive de la secretion est extremement dependante de la concentration extracellulaire en ions ca#+#+. L'ensemble des resultats m'a permis de dire que hlyd serait aussi impliquee dans l'activite de la toxine secretee, en interagissant directement avec hlya ou en assurant, par la formation d'une chambre de translocation etanche, que la toxine arrive dans le milieu externe non-pliee et prete a s'associer au calcium extracellulaire, ce qui fournirait l'energie necessaire pour tirer les molecules de hlya du sein du translocateur