Abstract FR:

Mon travail de these a ete consacre a l'etude pluridisciplinaire de la relation entre la structure et la fonction du cytochrome c#3(mr26000) de desulfovibrio desulfuricans norway. Le clonage du gene cycd codant pour cette molecule a mis en evidence la localisation periplasmique du cytochrome et a defini la nature monocistronique du gene cycd. La mise au point d'un systeme de production heterologue dans desulfovibrio desulfuricans g201, base sur l'utilisation d'un gene fusion, a permis par ailleurs, la synthese de cytochromes c multihemiques d'un genre distinct. Sur la base de la structure tridimensionnelle du cytochrome c#3(mr26000), la tyrosine 73 a ete substituee par un acide glutamique par mutagenese dirigee ponctuelle. Des methodes cinetiques a l'etat stationnaire et l'utilisation de la resonance plasmonique de surface (biacore) ont montre l'implication de la tyrosine 73 dans l'interaction entre le cytochrome et l'hydrogenase a nifese. Ceci indique que l'heme 4 est responsable du transfert inter-moleculaire des electrons avec l'hydrogenase. L'utilisation d'arn messagers antisens a mis en evidence le role important du cytochrome c#3(mr26000) dans le metabolisme energetique de desulfovibrio desulfururicans norway. Par ailleurs, l'etude de la specificite des cytochromes c#3(mr13000) et c#3(mr26000) vis a vis de l'hydrogenase a nifese a permis de proposer la chaine de transfert d'electrons liee a l'oxydation periplasmique de l'hydrogene par l'hydrogenase et a montre que le cytochrome c#3(mr13000) etait le partenaire privilegie de cette enzyme.