Abstract FR:

Dans les cellules eucaryotes, les produits des proto-oncogenes ras controlent la proliferation et la differenciation cellulaire en utilisant le mecanisme a interrupteur des proteines liant le gtp: dans la forme liee au gtp la proteine ras est active et declenche la transmission du signal en aval, alors que dans la forme liee au gdp elle se trouve dans l'etat inactif. A l'aide de systemes in vitro utilisant des composants purifies, j'ai analyse plusieurs aspects des interactions entre les proteines ras et ses regulateurs negatifs rasgap et positifs rasgef. Les proprietes biochimiques du domaine catalytique d'ira2p, une proteine rasgap de la levure saccharomyces cerevisiae, ont ete etudiees et comparees avec celles des domaines homologues des produits rasgap p120-gap et neurofibromine de mammifere. Dans ce contexte, nous avons aussi analyse l'effet de la tubuline, composant principal du cytosquelette et du fuseau mitotique, sur la regulation negative de ras. L'activite d'ira2p, comme celle de la neurofibromine (bollag et coll. , embo j. , 12, 1923-1927, 1993), est inhibee par la tubuline, qui cependant n'a pas d'effet sur la p120-gap. Alors que la p120-gap humaine stimule la gtpase des produits h-ras humain et ras2p de levure, l'activite d'ira2p de levure est specifique pour ras2p. Nous avons pu identifier les elements structuraux de la molecule ras necessaires a la reconnaissance specifique d'ira2p: la position 11 et la region 82-95. Ces resultats mettent en evidence le role important joue par l'helixe 3 de ras dans l'interaction ras-gap. La reconstitution in vitro du cycle de ras2p de s. Cerevisiae controle par les domaines catalytiques de ses regulateurs homologues ira2p et cdc25p, montre que ces deux elements peuvent agir de facon alternee sur leur substrat ras. Des experiences de competition pour la liaison a h-ras entre le domaine catalytique de sdc25p de levure et la proteine p120-gap humaine indiquent que ces deux regulateurs ne peuvent pas interagir de facon simultanee avec ras sous sa forme active, suggerant l'existence de phenomenes d'empechement sterique mutuel