Abstract FR:

Les fonctions de l'actine in vivo sont assurees par sa polymerisation en filaments helicoidaux (actine-f), dont la dynamique intrinseque provenant de leur activite mgatpase est regulee en particulier par la profiline. Cette proteine sequestre le monomere (actine-g) lorsque l'extremite dite barbee du filament est bloquee. Au contraire, le complexe profiline-actine-g-mgatp peut s'associer au bout barbe libre, ce qui cause un abaissement de la concentration critique partielle de polymerisation de l'actine-mgatp et donc facilite l'assemblage. Ce travail vise a cerner les bases physicochimiques de l'interaction profiline-actine. Le changement de la fluorescence proteique intrinseque a faible force ionique a ete mis a profit pour caracteriser la liaison profiline-actine-g, sensiblement plus forte que precedemment estime. Ensuite, l'utilisation de chelateurs specifiques des ions ca#2#+ et mg#2#+ ainsi que des analogues marques d'atp et d'adp a permis de quantifier l'influence de la profiline sur l'echange de ces entites sur le monomere: sans en modifier le mecanisme, la profiline diminue l'affinite du complexe cation-nucleotide pour l'actine-g et accelere sa dissociation. Une analyse systematique de profilines de differentes especes indique l'absence de rapport entre les effets de la profiline sur l'echange du nucleotide sur l'actine d'une part et sur la concentration critique d'une autre. Par ailleurs, une comparaison des comportements de la profiline vis-a-vis de l'actine-caatp ou -mgatp montre que c'est l'activite atpase du polymere que confere a la profiline la capacite a faciliter l'assemblage au bout barbe. Un examen de l'allongement des filaments a partir de sous-unites profiline-actine-g-mgatp revele que l'incorporation de l'actine et le depart de la profiline de l'extremite allongee sont declenchees par le clivage de l'atp. L'ensemble des resultats a ete integre dans un nouveau modele d'action de la profiline. Enfin, un pontage chimique entre l'actine-g et la profiline a ete effectue. Le complexe covalent purifie s'assemble en filaments qui possedent pratiquement la meme stabilite et la meme periodicite helicoidale que l'actine-f. Cette construction s'avere ainsi etre un excellent outil de travail pour sonder la structure du filament d'actine.