Abstract FR:

La maturation du transcrit primaire des arnt implique toute une serie de modifications chimiques au niveau de certaines bases et/ou riboses. Mon travail de these traite de l'etude de la biosynthese de plusieurs nucleotides modifies au sein des arnt d'une archaebacterie hyperthermophile, pyrococcus furiosus dont la temperature optimale de croissance est de 100\c. En utilisant des extraits cellulaires de p. Furiosus et des precurseurs d'arnt obtenus par transcription in vitro de genes synthetiques d'arnt, nous avons mis en evidence l'activite in vitro de douze enzymes de modification. Nous avons demontre que de simples structures tige-boucle sont substrats pour la plupart des enzymes de modification agissant au sein de la boucle t- des arnt. Nous avons defini que la biosynthese de la 1-methyl inosine-57 implique deux etapes distinctes et ordonnees, la synthese de 1-methyl-adenosine-57 dependant de la s-adenosyl-l-methionine (sam), puis une desamination de la 1-methyl-adenosine en 1-methyl inosine. Nous avons clone et sequence le gene pftrm1. L'expression de pftrm1p, chez e. Coli confere aux cellules la propriete de catalyser in vivo la biosynthese de m 2 2g dans les arnt de la cellule hote, depourvue de cette activite enzymatique. His 6pftrm1p, fusionne a son extremite n-terminale a une queue polyhistidine catalyse la biosynthese in vitro de m 2 2g exclusivement a la position 26 des arnt-substrats via la formation de l'intermediaire m 2g26. His 6-pftrm1p est monomerique en solution et forme un complexe de stoechiometrie 1:1 avec un arnt-substrat. L'enzyme se dissocie de l'arnt entre les deux transferts de groupe methyle sur la guanosine-26. Nous avons determine les elements d'identite de l'arnt requis pour la biosynthese de m 2g26 et de m 2 2g26.