Abstract FR:

La mise au point de methodes immunologiques appliquees au dosage d'haptenes necessite la mise en oeuvre de technologies particulieres du fait : -des faibles affinites generalement obtenues pour les anticorps anti-haptene -de la difficulte d'immobilisation des haptenes sur le support solide - de la necessite d'amplifier le signal de la sonde dans le cas de dosages de haute sensibilite. L'objectif de ce travail est de mettre au point des methodes immunocompetitives, non isotopiques, sensibles et fiables pour les dosages cliniques des hormones steroidiques, en particulier les oestrogenes plasmatiques ou urinaires chez la femme. Dans une premiere etape, nous avons selectionne et obtenu des anticorps monoclonaux anti-oestrogenes de haute affinite (1. 4 et 2. 10#1#0m#-#1) et d'etroite specificite, apres une etude de differents types d'immunogenes et d'immunisations. Dans une deuxieme etape nous avons effectue la synthese de differents immunoreactifs : - le marquage des anticorps par des sondes fluorescentes et par des sondes enzymatiques. Ces marquages ont ete effectues soit directement soit indirectement par l'intermediaire du systeme biotine/avidine. - le couplage des steroides a des proteines permettant leur immobilisation sur les supports solides. Dans une troisieme etape nous avons developpe quatre types d'immunodosages : -un fluoroimmunodosage des steroides a ete effectue a l'aide d'un fluorimetre a excitation laser hautement sensible, mis au point par une equipe du cnam. - un enzymoimmunodosage de l'oestradiol plasmatique chez la femme - un enzymoimmunodosage avec une amplification du signal enzymatique par le systeme biotine/avidine - un enzymoimmunodosage dot-blot des steroides et sa quantification au moyen d'un systeme de double fibres optiques. Cette meme methode permet la realisation de bandelettes test a reponse tout ou rien pour deceler la periode de fertilite chez la femme.