Abstract FR:

Deux types de gènes de tRNA tyrosine ont été isolés dans le génome de X. Laevis. Le premier (TyrC) est groupé avec 7 autres gènes de tRNA sur un fragment de 3. 18 kb répété 150X en tandem à un locus chromosomique unique. L’autre (TyrD), présenté dans cette thèse a été isolé à partir d’une banque de DNA génomique de X. Laevis. Il se trouve sur un fragment de 9. 4 kb présent à 1-3 copies par génome haploïde. Le gène TyrD a été séquencé, transcrit in vitro, et son produit analysé par fingerprinting. Les deux gènes ont des séquences adjacentes en 3’ et en 5’ différentes, des introns avec une homologie de séquence limitée en 3’. Le gène TyrD étant 6x mieux transcrit in vitro, nous avons construit des gènes hybrides et des mutants de délétion de chaque type. La transcription in vitro de ces gènes chimères nous permet de conclure que les séquences en 5’ (préférentiellement les 12 premières pb en amont du gène) sont responsables de cette transcription différentielle. Les séquences riches en GC en amont du gène TyrC semblent jouer un rôle inhibiteur dans la transcription. Il existe un gène de tRNAMetB sur le fragment de 3. 18 kb qui possède en amont une séquence de 8 pb avec alternance de purines et de pyrimidines, riche en GC. Des expériences d’insertions d’oligonucléotides synthétiques en amont de ce gène et de celui du tRNATyrD nous ont permis de tirer les conclusions suivantes : - les octamères ayant un fort potentiel Z-DNA (100% GC, stricte alternance Pu-Py) ne jouent un rôle sur la modulation de la transcription que lorsque insérés jusqu’à 30 pb en amont du gène ; - l’alternance en Pu-Py diminue significativement la transcription surtout lorsque le % en GC augmente. Nous avons analysé l’expression in vivo des 2 gènes de tRNATyr en hybridant des « Northerns blots » avec des oligonucléotides complémentaires des introns de chacun d’eux. Le 17-mer spécifique du gène dispersé (TyrD) hybride à une bande unique d’ARN de cellules somatiques, dont la taille correspond au transcrit primaire de ce gène, mais ne semble pas hybrider à l’ARN ovarien. Par contre, le 15-mer spécifique du gène groupé (TyrC) ne montre pas de signal avec l’ARN somatique mais hybride à un ARN ovocytaire dont la taille correspond à celle d’un précurseur non épissé dont les extrémités 5’ et 3’ ont été excisées. Les précurseurs intacts du gène TyrC sont détectables tout au long de l’oogenèse. Nous avons montré que dans les ovocytes prévitellogéniques, ces pré-tRNAs sont stockés dans les particules ribonucleeoprotéiques de 42S. Aucun des 2 précurseurs ne sont présents pendant les premières divisions synchrones de l’embryon. Les pré-tRNAs du gène TyrD ne sont détectables qu’à la transition mid-blastuléenne (stade 9) ; ils sont depuis lors accumulés. Les pré-tRNAs du gène TyrC existent aussi à la transition mid-blastuléenne mais leur présence décroit après le stade 10. Une sonde spécifique d’une partie commune aux 2 gènes permet de détecter les tRNAs matures tout au long de l’embryogénèse suggèrent que les précurseurs présent dans l’ovocyte sont dégradés à la fécondation. Ces changements dans l’expression des gènes de tRNATyr au cours du développement du xénope, contrastent avec ceux déjà connu pour les ARNs U1 et 5S.