Abstract FR:

Chez les eucaryotes, la transcription in vitro des gènes tARN par l'ARN polymérase C purifiée requiert au moins deux facteurs de transcription. Nous avons isolé l'un de ces facteurs à partir d’extraits acellulaires de levure par des méthodes chromatographiques conventionnelles et par chromatographie d'affinité sur colonne de gènes de tARN. Ce facteur, que nous avons appelé Tau, correspond à une protéine de poids moléculaire élevé (au moins 300. 000), probablement multimérique. Le facteur Tau forme des complexes stables et spécifiques avec les gênes de tARN. Par digestion ménagée de l’ADN par la DNase I et par méthylation partielle du gène, nous avons montré que le site de fixation du facteur à l’ADN est dédoublé et correspond aux deux blocs promoteurs internes, A et B, des gènes de tARN. Le facteur Tau est vraisemblablement constitué de deux domaines interagissant chacun avec un bloc promoteur. Le domaine Tau B, qui se lie à la région du bloc B, a pu être libéré par protéolyse ménagée du facteur. La liaison du facteur Tau à une série de gènes du tARN3Leu eu, dont la distance entre les blocs A et B varie de 0 à 74 paires de bases (pb), a été étudiée. La liaison de Tau est optimale lorsque les blocs A et B sont séparés par 28 à 62 pb ; ni la spécificité, ni la force de l’interaction ne sont affectées par des variations dans l’orientation hélicale relative des blocs A et B. Dans les autres cas, l'affinité moindre du facteur s'accompagne d'un affaiblissement ou même d'une perte de la liaison de Tau au bloc A. L’analyse des gènes courts (dont la distance AB est inférieure à 21 pb) a révélé des rôles différents pour chaque domaine de Tau : reconnaissance et ancrage de la protéine au gène, pour le domaine Tau B et positionnement correcte de l’ARN polymérase au site d'initiation de la transcription, pour le domaine Tau A.