Abstract FR:

L'action catalytique du metallo-enzyme anhydrase carbonique (e. C. 4. 2. 1. 1) est liee au transfert intramoleculaire d'un proton au site actif. Nous presentons la premiere etude detaillee et comparative de la reaction de protolyse de trois anhydrases carboniques erythrocytaires. Les deux formes humaines hcai et hcaii et la forme bovine bcaii sont etudiees par l'intermediaire d'un ion cobalt (ii) utilise en spectrophotometrie visible comme une sonde du site actif de la proteine. Dans un premier temps, nous exposons les methodes de purification, de preparation et de caracterisation que nous avons du adapter aux grandes quantites d'enzymes necessaires a la suite de l'etude. Dans la seconde partie, nous avons determine par une methode de dosage automatisee les constantes de protonation des trois isoenzymes pour differentes forces ioniques. Puis, nous avons etudie l'influence de l'ion sulfate et d'autres anions monovalents (clo#4# et cf#3so#3#) qui presentent des interactions faibles avec la proteine et montre que les differents isoenzymes y sont diversement sensibles. Les faibles effets de ces anions sur le spectre visible des enzymes rendent peu vraisemblable la formation de complexes de sphere interne entre l'ion metallique et l'anion considere. Ceci est confirme par les faibles valeurs des constantes de stabilite des entites ainsi formees et par l'allure des spectres theoriques calcules qui n'indique pas de changement de coordination de l'ion cobalt. Une etude de catalyse enzymatique vient enfin confirmer nos mesures thermodynamiques. L'ensemble de ces resultats est ensuite interprete en terme de structure moleculaire et l'existence de sites anioniques supplementaires est discutee. L'ensemble des resultats acquis au cours de ce travail devrait permettre d'envisager l'etude de mutants genetiques des anhydrases carboniques