Abstract FR:

Le flavocytochrome b₂ « intact » de S. Cerevisiae a été cristallisé en présence de 2-methyl-2,4-pentanediol. Dans la première partie de ce travail (Chapitre I) on s’est posé le problème de savoir si la structure et l’activité de l’enzyme étaient influencées et de quelle façon par la présence de ce solvant et par l’organisation des molécules dans le réseau cristallin. On a mis en évidence que : 1/ la présence de solvant inhibe l’activité catalytique de l’enzyme en solution et provoque une déstabilisation réversible du site flavinique. 2/ L’organisation des molécules dans l’état cristallin se démontre compatible avec la réactivité de l’enzyme en présence de substrats, accepteurs et ligands spécifiques. Dans la deuxième partie de ce travail (Chapitre II, III et IV) on a d’abord essayé de caractériser les vitesses d’échange intramoléculaire d’électrons entre flavine et hème au sein du flavocytochrome b₂ de Hanseluna anomala, puis de caractériser l’action du pyruvate sur les propriétés cinétiques et à l’équilibre du flavocytochrome b₂. On a mis en évidence que : 1/ la réaction de transfert d’électrons de la flavine réduite à l’hème oxydé, à ph 6. 0, est caractérisé par une constante de vitesse de l’ordre de 1800 s-1 à 16°C. Le transfert depuis la flavine semiquinone à l’hème oxydé, probablement appartenant à deux sites actifs adjacents, est environ 10 fois plus lent, à la même température. 2/ La présence du pyruvate provoque un fort déplacement du potentiel rédox (environ 80mV) de chaque couple de la flavine, dans le sens de la stabilisation de la forme semiquinone. 3/ Du point de vue cinétique, l’activité catalytique de l’enzyme est inhibée en présence de pyruvate. Des essais d’interprétation du mécanisme d’inhibition ont été faits par simulation.