Abstract FR:

Chez S. Cerevisiae deux iso cytochromes l'iso1 et l’iso2 cyt c sont synthétisés. Ils sont codés par deux gènes indépendants : CYC1 et CYP3 ; ils sont exprimés respectivement à des taux très différents, 95% et 5%. La possibilité de sélectionner des mutations surproductrices diso2 cyt c nous a permis de mettre en place un système génétique qui comprend d'une part, des mutations du gène de structure CYP1 de type "promotor up" agissant en cis et d'autre part, des mutations indépendantes des gènes de structure agissant en transe, tout particulièrement au locus CYP1. L'étude génétique des allèles mutés aux différents loci ainsi que les interactions entre mutations agissant en cis et celles agissant en trans, nous a permis d'élaborer un modèle de régulation de l'expression du gène de structure de l’iso2 : CYP3. L'analyse moléculaire a montré que les quatre mutations obtenues au locus CYP3 sont des macros lésions affectant la région située entre 140 et 500 paires de base en amont de la région codante. Deux d'entre elles sont des insertions à des positions différentes de transposons de type TYl, la troisième est une grande délétion affectant également l'expression d'un gène voisin, enfin la dernière est une petite délétion. CYP1 est un des loci agissant en trans. Nous avons montré que le produit de ce gène se comporte comme un activateur. La construction de souches double mutantes, associant à chaque mutation de type "promoter up" un des allèles mutés au locus CYP1 a montré que deux des mutations cis actives restent sous le contrôle du produit codé par CYP1, alors que les deux autres lui échappent en partie pour l'une et totalement pour l’autre. Un des allèles mutés au gène CYP1 a été cloné. LB séquence d'un fragment de 5,3 Kb a révélé que celui-ci code pour une protéine potentielle de 1. 483 acides aminés qui présente les caractéristiques d'une protéine ''DNA binding". L'analyse par "orthern blot" révèle la présence de deux transcrits de 4,8 et 2,2 Kb approximativement. La transcription du gène n'est sensible ni à l'oxygène, ni à l'hème, ni au substrat carboné. Nous avons montré que HAP1 identifié par Guarente comme nécessaire à l'activité de l'UAS (Upstream Activating Sequence) du gène CYC1 et CYP1 sont le même gène. Nous avons également montré que le produit " de CYPl est médiateur des effets de l'hème sur l'expression de gènes dépendants de l'oxygène.