Sondes oligonucleotidiques non radioactives - application a la detection des papillomavirus
Institution:
Paris 11Disciplines:
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Un test de depistage et de typage des infections a papillomavirus humains (hp) de type 6, 11, 16, 18, 31 ou 33 a ete developpe. La methode choisie est une hybridation sur plaque de microtitration avec des sondes oligonucleotidiques biotinylees apres amplification enzymatique in vitro. Un couple d'amorces specifiques de chacun des 6 types de pvh a ete selectionne et les conditions optimales de leur utilisation ont ete determinees. Le choix des plaques de microtitration comme support pour la mise en evidence des produits amplifies par hybridation a conduit a etudier la fixation des fragments amplifies sur ce nouveau support et les elements succeptibles d'interferer avec cette fixation (detergents, proteines, magnesium). Les conditions de marquage des sondes, d'hybridation et de detection des hybrides biotinyles ont egalement fait l'objet d'une etude specifique. Le protocole etabli a ete valide au cours d'une etude technique et d'une etude clinique sur 64 echantillons biologiques. Les resultats obtenus pour la mise en evidence des papillomavirus permettent d'envisager l'application de la technique developpee a la mise en evidence d'autres agents pathogenes apres amplification enzymatique in vitro