Abstract FR:

La molecule d'arn de transfert est au centre d'un grand nombre de regulations biologiques, liees a la traduction proteique. Le sujet d'interet principal de cette these est l'etude de mutants affectes dans l'arn de transfert charge par la phenylalanine (arnt#p#h#e), chez escherichia coli, en particulier a travers un systeme biologique derive d'attenuateurs de la transcription, ceux des operons phea et phes,t. Deux mutants de cet arnt#p#h#e, a44 et a46, ont des effets tres differents sur la traduction des peptides leader associes a chacun de ces operons, controles par la vitesse de traduction aux codons phenylalanine. Nous avons caracterise leur defaut respectif en presence d'un exces de phenylalanyl-arnt synthetase et en transformant, par mutagenese dirigee, l'anticodon de ces arnt mutants pour etre specifique de la lecture des codons non-sens uag, afin de mesurer l'efficacite de lecture de chacun des doubles mutants aux codons uag. A44 semble agir par competition pour la reaction d'aminoacylation avec les arnt#p#h#e sauvages aussi presents et a46 serait partiellement deficient dans l'elongation peptidique. D'autre part, en utilisant un systeme detecteur de changement de cadre de lecture, nous avons mis en evidence un defaut dans l'etape de translocation de deux autres mutants d'arnt#p#h#e, u2 et a15. Enfin, nous avons isole un suppresseur de mutation faux sens au niveau des codons cuc/u, dans l'arnt#p#h#e, porte par un plasmide. La sequence de ce dernier, determinee par la technique de pcr asymetrique, a revele la transformation de son anticodon gaa en gag. L'ensemble de ce travail est en accord avec des modeles, replacant l'importance de la molecule entiere d'arnt dans le processus de reconnaissance des codons et l'elongation des chaines polypeptidiques