Abstract FR:

L'objectif general de cette etude est le developpement d'un procede de purification des acms, pouvant etre integre aux systemes de culture d'hybridomes a haute densite. Le procede mis au point comporte deux etapes separatives. La premiere etape, visant a pretraiter le milieu de culture prealablement debarrasse des cellules, nous a conduit a developper un systeme de filtration tangentielle compact et performant, qui assure successivement la concentration et la diafiltration des acms. Ces deux phases permettent d'ameliorer significativement les performances, en terme de productivite, de l'etape suivante de separation proprement dite, par chromatographie. Pour realiser cette deuxieme etape, nous avons procede a l'analyse de differents supports de chromatographie d'echange d'ions. L'optimisation des conditions operatoires (ph, force ionique) nous a permis de developper un procede de separation de productivite et de capacite elevees fournissant un acm hautement purifie. Rapide et non denaturant pour les acms, il a ete valide sur une population representative d'acms et a ete extrapole avec succes a l'echelle pilote. Par ailleurs, l'etude de supports de chromatographie plus particuliers a base d'hydroxyapatite a permis d'approfondir le mecanisme de separation des acms grace a de tels supports. Plusieurs acms de caracteristiques physicochimiques particulieres (ph#i) et difficiles a purifier par les techniques classiques d'echange d'ions ont pu etre isoles de cette facon. Enfin, les deux etapes de pretraitement et de separation ont ete integrees dans un procede unique permettant le traitement a l'echelle pilote de surnageants de culture issus d'un reacteur perfuse. Une comparaison des performances techniques et economiques avec d'autres systemes a pu etre etablie