Abstract FR:

Les oligonucleotides et les genes sont potentiellement des agents therapeutiques puissants, mais leur faible penetration dans la plupart des cellules limite leur efficacite. Les lectines membranaires sont presentent a la surface de nombreuses cellules, ou elles induisent l'endocytose de leurs ligands mais egalement a l'interieur des cellules ou elles sont impliquees dans le trafic intracellulaire. En consequence, la liaison covalente d'oligonucleotides avec des glycoconjugues de type neoglycoproteines ou l'association par interactions electrostatiques d'acides nucleiques avec des polylysines glycosylees augmentent a la fois leur penetration dans les cellules cibles et leur activite biologique. Les lectines reconnaissent specifiquement et avec une tres forte affinite des structures oligosidiques complexes ; des glycoconjugues comportant des oligosides complexes devraient etre d'excellents vecteurs plus selectifs d'un type cellulaire que les osides simples. Cependant, les oligosides complexes sont peu reactifs, pour etre fixes sur un polymere, une proteine ou un oligonucleotide, ils doivent etre fonctionnalises. Le procede que nous avons mis au point permet, dans un seul reacteur et en seulement deux etapes, d'obtenir rapidement et avec un excellent rendement des glycosynthons. Un derive de l'acide glutamique est condense par sa fonction alpha nh2 a l'hydroxyle anomerique de l'ose reducteur de l'oligoside. Cette etape de condensation rapide (95% de couplage apres 6 heures) conduit a un compose stable apres acylation intramoleculaire du derive de l'acide glutamique. Cette seconde etape est realisee en 30 minutes en activant la fonction carboxylique de la chaine laterale de l'acide glutamique. Cette methode fonctionne avec tous les oligosides, quelque soit l'ose en position terminale reductrice. Divers glycosynthons (glycosylamides) ont ete prepares, differents selon le substituant present sur le derive de l'acide glutamique utilise : un derive possedant une fonction no2, qui peut etre reduite et transformee en isothiocyanate, un derive dithiopyridyle et un derive pyroglutamate. Pour selectionner les ligands permettant de cibler specifiquement un type cellulaire donne, plusieurs glycosylamides ont ete fluoresceinylees, par reaction avec le derive 5-iodoacetamide de la fluoresceine, et leur affinite ainsi que leur endocytose testees, par cytometrie en flux et microscopie confocale, sur des lymphocytes et des macrophages. Les glycosynthons synthetises ont egalement ete fixes sur des polylysines pour obtenir des vecteurs de genes plus specifiques ainsi que directement a des oligonucleotides ; les oligonucleotides possedant une fonction thiol reactive ont ainsi ete transformes en glyco-oligonucleotides. Ces glycoconjugues porteurs de signaux de reconnaissance oligosidiques sont efficaces pour augmenter specifiquement l'endocytose des oligonucleotides et des genes et pour transfecter les cellules. En conclusion, de tels glycosynthons pourraient etre tres utiles pour etudier plus precisement la specificite des lectines endogenes et probablement decouvrir de nouvelles lectines ainsi que pour augmenter specifiquement l'efficacite d'agents therapeutiques en favorisant leur endocytose dans les cellules cibles.