Abstract FR:

Le fgf-2 est un facteur de la differenciation cellulaire synthetise sous differentes isoformes presentant des localisations intracellulaires variables. Ainsi, de nombreuses questions se posent concernant l'adressage de ces isoformes vers les differents compartiments intracellulaires et leurs roles respectifs dans les mecanismes de regulation cellulaire. Dans ce travail, nous avons recherche les voies de transport de 2 isoformes du fgf-2 et leurs roles respectifs dans la regulation de l'expression d'elements de la mec. Pour cela, nous avons choisi comme materiel d'etude: i) une lignee de cellules cancereuses acineuses pancreatiques de rat (ar4-2j) transfectees par la forme courte (18 kda, clone a5) ou longue (22,5 kda, clone a3) du fgf-2, ii) une lignee de cellules de type fibroblastique (crip) transfectees par la forme sauvage du fgf-2 (clone b4). Des cellules temoin ont ete obtenues apres transfection des cellules ar4-2j et crip avec le gene de la chloramphenicol acetyltransferase. Les localisations du fgf-2 ont ete etablies apres immunocytochimie et observation par microscopie confocale. Dans les cellules a5, le fgf-2 de 18 kda a ete detecte dans le cytoplasme, a la surface des cellules et dans les nucleoles. Une localisation identique a ete observee dans les cellules ar4-2j cultivees en presence de fgf-2 exogene (18 kda), suggerant que la forme courte du fgf-2 pourrait etre secretee puis internalisee et adressee aux nucleoles. Dans les cellules a3, le fgf-2 de 22,5 kda a ete essentiellement localise dans le nucleoplasme, mais jamais a la surface des cellules, suggerant que la forme longue serait directement nuclearisee. L'utilisation des techniques de western blot et northern blot ont permis de montrer que la transfection des cellules ar4-2j par le fgf-2 n'induit aucune modification de l'expression du collagene iv, mais que la forme longue du fgf-2 induit une diminution de l'expression de la chaine b1 de la laminine (ln b1) en diminuant la stabilite de ses arnm. Par contre, dans les cellules crip transfectees par la forme sauvage du fgf-2, l'analyse par northern blot a montre que ces cellules exprimaient 2 fois plus d'arnm de la ln b1 que les cellules temoin, demontrant que la forme sauvage du fgf-2 peut stimuler l'expression de la ln b1. D'autre part, dans le but d'aborder les modes d'action des differentes isoformes du fgf-2, nous avons recherche le role respectif des formes courte et longue du fgf-2 dans l'expression de ses recepteurs. Les etudes de liaison ont revele une augmentation (x3) des recepteurs de basse et haute affinite (fgfr-1) dans les cellules a3, et une augmentation (x2) seulement des fgfr-1 dans les cellules a5. Nos travaux ont egalement montre que la suramine n'affectait pas la liaison du fgf-2 aux fgfr-1 dans les cellules qui expriment la forme longue du fgf-2, et que cette meme forme induisait une augmentation de la duree de vie des arnm des fgfr-1. Ces resultats suggerent que le fgf-2 de 22,5 kda regule l'expression des recepteurs de haute affinite par voie intracrine en augmentant la stabilite des arnm. En resume, les resultats presents apportent des arguments en faveur de l'implication du fgf-2 dans la regulation de la mec et des sites recepteurs au fgf-2