Abstract FR:

La darpp-32 (dopamine- and camp-regulated phosphoprotein, mr=32,000) est une proteine inhibitrice de la proteine phosphatase 1 (pp 1) dont l'activite est regulee par la phosphorylation de plusieurs residus. La darpp-32 devient un puissant inhibiteur de la pp 1 lorsqu'elle est phosphorylee sur la threonine-34 par la kinase activee par l'ampc (pka). La darpp-32 est aussi un substrat de la caseine kinase ii. Pour permettre les etudes biochimiques et physico-chimiques, la darpp-32 de rat a ete exprimee dans la bacterie et purifiee en grande quantite. Les etudes conformationnelles nous ont indique que la darpp-32 comprend un domaine amino-terminal relativement rigide et un domaine carboxy-terminal plus flexible. La phosphorylation de la threonine-34 ne modifie pas la conformation globale de la darpp-32, mais cree un site de relativement faible affinite pour la proteine phosphatase 1 qui, en se combinant avec un second site de faible affinite non-regule par phosphorylation, transforme la darpp-32 en un inhibiteur de haute affinite pour la phosphatase. La phosphorylation de la darpp-32 par la caseine kinase ii n'induit qu'une faible modification de la structure de la darpp-32, intervenant essentiellement dans la partie rigide carboxy-terminale de la proteine. Nous avons ensuite mis en evidence la phosphorylation de la darpp-32 sur la serine-137 par la caseine kinase i dans les neurones striatonigraux et etudie les parametres biochimiques de cette reaction in vitro. La phosphorylation de la serine-137 accelere, de facon inhabituelle, la migration de la darpp-32 en gel de polyacrylamide en presence de sds. La phosphorylation de la darpp-32 par la caseine kinase i inhibe la dephosphorylation de la threonine-34 par la calcineurine, in vitro et dans les neurones striatonigraux