Abstract FR:

Ce travail de these a consiste a determiner dans quelle mesure et sous quelles conditions il etait possible d'utiliser la spectrometrie de masse avec ionisation electrospray (esms) pour la caracterisation de complexes biologiques non covalents. Pour cela, un certain nombre de complexes non covalents mettant en jeu des proteines et des oligonucleotides ont ete etudies. Pour la caracterisation de complexes non covalents mettant en jeu des oligonucleotides, une methodologie particuliere a leur etude est presentee. Une nouvelle procedure de dessalage rapide et efficace, associee au remplacement des contre-cations residuels par des ions ammonium, a ete mise au point ce qui a permis d'etendre les possibilites de l'esms a la caracterisation d'oligonucleotides synthetiques ou naturels, modifies chimiquement ou non, jusqu'a des masses moleculaires de 40 kda avec une excellente precision (0,01%). Des conditions experimentales assurant le maintien de liaisons non covalentes specifiques en solution et conciliables avec la technique d'esms ont ete etablies. Elles ont permis de caracteriser avec succes des interactions non covalentes du type oligonucleotide-peptide, duplex d'oligonucleotide-antibiotique (distamycine et actinomycine), antigene-anticorps, proteine-proteine (alcool deshydrogenase). Enfin, une etude detaillee des interactions specifiques enzyme-cofacteur-inhibiteur de l'aldose reductase est presentee. Cette etude a montre qu'il est possible de determiner la specificite et la stoechiometrie de complexation du cofacteur et d'une serie d'inhibiteurs. L'esms devient donc une methode utile pour explorer la structure tridimensionnelle des biomolecules et pourra se presenter comme une alternative interessante aux methodes deja bien etablies telles que la rmn ou la diffraction aux rayons x