Abstract FR:

Les enzymes proteolytiques sont d'un grand interet en raison de leurs roles essentiels dans les systemes biologiques et de leur utilisation comme outils dans la modification des proteines. La recherche de nouvelles proteases capables de catalyser l'hydrolyse de proteines a des sites de coupure inedits apparait donc essentielle. Dans ce cadre, une protease originale a ete purifiee a partir du suc digestif d'escargot archachatina ventricosa. Le procede de purification comporte une filtration sur gel, une chromatographie echangeuse d'anions et une chromatographie d'interaction hydrophobe. L'enzyme purifiee montre deux bandes proteiques en electrophorese sds-page, avec des masses moleculaires estimees a 90000 et 121000. Elle presente une activite proteolytique maximale a ph 8,0 et a 55\c. Son point isoelectrique se situe autour de 5,2. Son activite est totalement inhibee par l'edta et le 1,10-phenanthroline, mais elle peut etre restauree par de faibles concentrations de zinc, ce qui suggere que l'enzyme est une metalloprotease a zinc. L'activite de l'enzyme est fortement diminuee en presence de cuivre, de fer, de sds et de -mercaptoethanol. Les etudes de specificite de substrats montrent que seules les liaisons amides des substrats peptidiques ayant un residu threonine en position p1 sont hydrolysees par la protease. Cette hydrolyse se fait plus rapidement lorsque la threonine se trouve a l'interieur de la chaine peptidique qu'en position c-terminale. Cette nouvelle protease, appelee endoprotease thr-n, ne montre aucun determinant antigenique commun et aucune homologie de sequences peptidiques avec les autres proteases connues a ce jour. Elle est localisee dans les bordures en brosse de l'intestin et de l'estomac de l'escargot. Cette endoprotease constitue un nouvel outil pour l'etude des proteines et de la separation de domaines. Elle peut etre egalement utilisee pour generer des peptides originaux ayant des proprietes fonctionnelles ou biologiques interessantes.