Caractérisations fonctionnelle et moléculaire de transporteurs impliqués dans les échanges de cations organiques au niveau des barrières hémato-encéphalique et hémato-oculaire chez la souris
Institution:
Paris 5Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
The molecular exchanges located at the blood-brain barrier (BBB) constituted of the endothelia of brain capillaries and at the retinal capillaries and at the retinal pigmentary epithelium forming respectively the inner and outer blood-retinal barriers (BRB), which could be assimilated to the blood ocular barriers, are regulated by the presence of transporters which facilitate influx in and/or efflux from brain or retinal parenchyma. Our research dealt with the identification, in vivo, in mice, of organic cation transporters present at these interfaces and responsible in particular for the psychotropic permeation, using the in situ carotid perfusion method, the real-time PCR technique and the immunofluorescence technique in fixed tissues. We were interested in the cationic/proton antiporter “of tertiary amine” or said to be transporter “of clonidine” and in the organic cation transporter (Oct) family. We demonstrated the expression at the brain and ocular interfaces of the “high-capacity, low-affinity” transporter said to be “of clonidine”, not yet molecularly identified. Its functional characterization was accomplished, showing the lack of direct coupling with sodium, potassium and chloride but the proton influence allowing an antiporter functioning. The identification of other substrates notably opiate-type drugs and nicotine could be achieved. However, the expression of Oct1, 2 and 3 could not be shown at the BBB whereas an expression of the Oct2 transporter could be functionally established at the BRB; moreover, at the BRB, the expression of the monoamine Net-like transporter could be functionally characterized
Abstract FR:
Les échanges moléculaires localisés au niveau de la barrière hémato-encéphalique (BHE) et au niveau des capillaires rétiniens et de l’épithélium pigmentaire formant respectivement les barrières hémato-rétiniennes interne et externe (BHR), dont l’association est assimilée aux barrières hémato-oculaires, sont régulés par la présence de transporteurs facilitant l’entrée et/ou la sortie du parenchyme cérébral ou rétinien. Nos recherches ont porté, in vivo chez la souris, sur l'identification de transporteurs de cations organiques présents au niveau de ces interfaces à l’aide de la technique de perfusion carotidienne in situ, de la technique de PCR en temps réel et de la technique d’immunofluorescence sur tissu fixé. Nous nous sommes intéressés à l’antiport proton/cations organiques « d’amine tertiaire » ou dit « de la clonidine » et de la famille de transporteurs de cations organiques (Oct). Nous avons démontré l’expression fonctionnelle au niveau des interfaces cérébrale et oculaire du transporteur de « haute capacité, faible affinité » de la clonidine dont l’identité moléculaire est inconnue. Sa caractérisation fonctionnelle a été accomplie indiquant l’absence de couplage directe avec les ions sodium, potassium et chlorure mais l’influence de protons permettant un fonctionnement de type antiport. L’identification d’autres substrats notamment de type opiacés et de la nicotine a pu être réalisée. En revanche, les transporteurs Oct1, 2 et 3 n’ont pu être mis en évidence au niveau de la BHE alors que les expressions du transporteur Oct2, et également d’un transporteur de monoamines de type Net, ont pu être objectivées fonctionnellement au niveau des BHR