Abstract FR:

Les p450s constituent une superfamille de proteines a heme-thiolate impliquees dans l'oxydation primaire de substances endogenes importantes et d'un grand nombre de medicaments ou de procancerogenes. Afin d'etudier les proprietes specifiques de p450s humains de la famille 3a, une des famille majoritaire au niveau du foie, nous avons choisi de produire ces proteines dans la levure saccharomyces cerevisiae. Quatre variants du p450 3a4 humain (nf25, hpcn1, nf10 et nf25-t309a) et le p450 3a5 (hpcn3) ont ete exprimes dans la levure. Nous avons compare leurs capacites a reconnaitre et a metaboliser divers medicaments couramment utilises en clinique comme la nifedipine, la quinidine, la lidocaine ou la testosterone. Nous avons exprime l'adnc du p450 nf25 dans de nouvelles souches de levures genetiquement modifiees capables de surproduire les enzymes de transfert d'electrons associes au p450: nadph-p450 reductase de levure et cytochrome b#5 humain. Nous avons pu augmenter considerablement le niveau d'activite du p450 nf25 dans les microsomes de levure, d'un facteur 15 a 50 selon les substrats. Dans une troisieme partie, nous avons montre que differents alcaloides peptidiques de l'ergot de seigle constituaient une nouvelle classe de substrats ayant une affinite tres elevee pour le p450 3a4 humain (p450snf25 et hpcn1). Nous avons egalement montre que les p450s 3a4 et 3a5 humains catalysent l'hydroxylation regioselective d'un de ces ergopeptides, la bromocriptine, au niveau de la partie peptidique de la molecule. La derniere partie de ce travail consistait a proposer des conditions experimentales plus appropriees pour l'utilisation de microsomes de levure contenant une forme donnee de p450 humain. Ce travail illustre l'interet d'un tel systeme d'expression heterologue pour caracteriser des formes individuelles de p450s humains. Il permet d'etudier et de prevoir les premieres etapes du metabolisme hepatique de nouvelles molecules therapeutiques, les effets toxiques potentiels par activation metabolique et d'eventuelles interactions medicamenteuses