Abstract FR:

Notre travail a permis la caracterisation des roles que le propeptide de la protease alcaline exocellulaire (aep) de la levure yarrowia lipolytica assure au cours de la secretion et de l'activation de l'aep. La protease est synthetisee sous forme de prepro-proteine. Les maturations successives du precurseur par un signal peptidase, une dipeptidyl aminopeptidase et une endoprotease de type kex2p entrainent la secretion de la protease mature et active dans le milieu exocellulaire. Nous montrons que le propeptide assume une fonction essentielle lors du transit de la protease a travers les compartiments precoces de la voie de secretion. Des mutations creees dans la sequence propeptidique deletions ou destruction du site unique de n-glycosylation conduisent a l'accumulation intracellulaire de formes precurseurs inactives. Celles-ci franchissent la premiere etape du parcours de secretion car le clivage de leur peptide signal s'accompagne d'une translocation complete dans le lumen du re. Elles sont en revanche incapables d'atteindre l'appareil de golgi ou devrait s'effectuer leur maturation par la dpap et l'endoprotease de type kex2p. Elles ne parviennent pas en outre a acquerir la conformation finale de la protease, resistante a la proteinase k. Nous definissons la contribution du propeptide au cours du transport de l'aep grace a une experience de complementation en trans. La co-expression d'une construction codant pour le seul peptide pro, et de celle codant pour un precurseur pro-delete, provoque le retablissement du transit intracellulaire du precurseur mute. Dans une souche trans-complementee comme dans une souche sauvage, la secretion de la forme mature s'accompagne, en quantite equimolaire, de celle du propeptide. L'analyse des cinetiques de secretion etablit une etape limitante lors du sauvetage des precurseurs mutes: avant la proteolyse par kex2p. Ces resultats suggerent que le propeptide est necessaire a une etape precoce du parcours de secretion afin de procurer aux precurseurs une conformation compatible avec leur transport. Lorsque leur transit est retabli, les precurseurs pro-deletes acquierent une activite enzymatique partielle. L'activite recuperee s'accompagne d'un changement de conformation car les formes secretees sont devenues resistantes a la proteinase k. Ceci suggere que le propeptide assume une seconde fonction aupres des precurseurs proteasiques, au cours de l'acquisition d'une configuration active