Abstract FR:

Ce travail porte sur l'etude de l'organisation fonctionnelle de l'aspartyl-trna synthetase cytoplasmique de levure (asprs). Son objet etait de reperer l'ensemble des elements contribuant directement ou indirectement a l'activite du site catalytique de l'enzyme puis d'etablir leurs fonctions. Dans une premiere partie de cette etude, nous nous sommes interesses aux residus du site actif de l'asprs. Nous avons evalue leur importance au travers de l'effet que pouvait produire leur mutation sur la croissance de la levure ; a cette fin, un systeme de chasse de plasmide utilisant le gene furi a ete mis en uvre. Une bonne correlation a pu etre observee entre les activites des asprs mutees, mesurees in vitro, et le niveau de croissance des cellules transformees correspondantes. Dans le deuxieme volet de notre travail, nous avons recherche de maniere systematique l'ensemble des residus de l'asprs dont la mutation etait susceptible d'affecter la croissance de la cellule. L'approche utilisee a consiste a selectionner par crible genetique, dans une banque de genes aps mutes au hasard, les mutants d'asprs devenus inactifs. Cette analyse nous a permis de reperer de nouveaux residus impliques dans la reconnaissance des substrats. Par la suite, et nous appuyant sur un systeme de selection mettant a profit les proprietes regulatrices du promoteur gals, nous avons verifie dans quelle mesure la substitution des residus hautement conserves de l'asprs pouvait affecter l'activite de l'enzyme. Il est apparu que seuls sont substituables les residus n'intervenant pas directement dans la fixation des substrats. Enfin, par la construction puis l'analyse des proprietes de mutants de deletion, nous avons aborde l'etude de l'organisation modulaire de l'asprs. L'importance de la structure en tonneau de la partie n-terminale et celle des helices h5, h6, h7 et h8 du domaine catalytique a clairement pu etre mise en evidence.