Abstract FR:

Afin d'analyser le role du levane, produit par bacillus polymyxa, dans le processus de colonisation de la rhizosphere du ble, nous avons construit par genetique inverse une souche derivee de b. Polymyxa cf43 mutee dans le gene de structure de la levane-saccharase, sacb. Celui-ci a d'abord ete clone et sequence. Il code pour une proteine de 499 acides amines qui presente 65% d'identite avec levane-saccharase (ls) de bacillus subtilis et une similarite notable avec d'autres fructosyltransferases. La ls de b. Polymyxa est exocellulaire et sa synthese est inductible par le saccharose. Le gene sacb de b. Polymyxa a ete inactive in vitro par insertion d'une cassette cat de resistance au chloramphenicol, puis transfere par conjugaison depuis e. Coli vers b. Polymyxa. Les transconjugants dans lesquels la copie sauvage chromosomique de sacb a ete remplacee par la copie mutee par recombinaison homologue ont ete reperes en selectionnant directement pour la resistance au chloramphenicol. La souche sacb'::cat de b. Polymyxa a ete analysee pour sa capacite a s'attacher aux racines de ble, mais aucun effet direct de la ls n'a pu etre mis en evidence par les tests utilises. Le gene lela de b. Polymyxa cf43, codant pour une activite saccharolytique, a ete isole a partir d'une bibliotheque genomique de b. Polymyxa criblee chez b. Subtilis. Ce gene a ete sequence ; il code pour une proteine de 512 acides amines qui presente 54% d'identite avec la levanase de b. Subtilis et une similarite notable avec d'autres fructanases et saccharases. Contrairement a la levanase de b. Subtilis, lela ne possede pas de sequence signal canonique. Nous avons montre que, outre le saccharose, lela est capable d'hydrolyser le levane et l'inuline. Ceci confirme que lela est une fructanase. Le gene lela chromosomique de b. Polymyxa a ete inactive par genetique inverse. Ce mutant n'est cependant pas affectee dans l'utilisation du levane ou de l'inuline comme seule source de carbone