thesis

Accumulation de l'ectoine par brevivacterium linens en conditions de contrainte osmotique : role osmoprotecteur chez escherichia coli et rhizobium meliloti

Defense date:

Jan. 1, 1994

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Institution:

Rennes 1

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Abstract FR:

Brevibacterium linens, bacterie gram positive coryneforme, halotolerante, accumule l'ectoine comme osmolyte organique majoritaire sous contrainte hyperosmotique. Ce solute contribue a plus de 80% de l'osmolarite du milieu intracellulaire, lorsque les cellules sont cultivees sur milieu minimum defini (lgs) additionne de nacl 1m. En presence d'osmoprotecteurs exogenes, comme la proline ou la glycine betaine, la croissance de b. Linens a forte osmolarite est amelioree. B. Linens possede des transporteurs specifiques et constitutifs pour la glycine betaine, la choline, l'ectoine et la proline; l'activite de ces transporteurs est modulee par les changements de l'osmolarite du milieu. L'effet de certains osmoprotecteurs exogenes sur la biosynthese de l'ectoine a ete etudie en combinant des analyses chromatographiques (hplc, chromatographie sur papier, ou sur une couche mince) des analyses spectroscopiques (rmn) et en utilisant des molecules marquees au carbone 14. L'addition de la glycine betaine dans le milieu de culture inhibe l'accumulation de l'ectoine, par contre la proline declenche des mecanismes d'osmoadaptation chez b. Linens, via sa propre metabolisation et par activation de la biosynthese de l'ectoine. L'ectoine a ete purifiee et son effet osmoprotecteur, ses modalites de transport et d'accumulation ont ete determinees chez escherichia coli; comme la plupart des osmoprotecteurs connus, l'ectoine emprunte les systemes prop (km=220 m) et prou (km=200 m). L'ectoine induit l'adaptation osmotique chez r. Meliloti; elle possede son propre transporteur (km=80 m) dependant d'une proteine periplasmique affine; ce solute n'est toutefois jamais trouve accumule chez r. Meliloti. Il active de maniere tres significative l'accumulation du glutamate chez cette bacterie et sa presence ne perturbe pas la biosynthese des autres osmoprotecteurs endogenes. De plus, il a ete mis en evidence, pour la premiere fois, un effet benefique d'un osmoprotecteur (ectoine) sur la croissance d'autres rhizobia insensibles a la glycine betaine en conditions osmotiquement inhibitrices