Abstract FR:

Nous nous sommes d'abord attaches a developper un nouvel outil permettant l'etude, non invasive, de la secretion regulee. Nous avons tire parti des proprietes de l'homeodomaine d'antennapedia (antphd) qui a la capacite de traverser les membranes des cellules en culture par un mecanisme independant de l'endocytose classique. Nous avons fusionne a antphd les 33 acides amines carboxy-terminaux d'une petite proteine g, rab3a, impliquee dans l'exocytose regulee. Nous avons montre que la proteine de fusion ar3ac est internalisee sans degradation par des cellules en culture, validant ainsi antphd comme vecteur de peptides exogenes. Nous avons utilise ce vecteur pour etudier la fonction de rab3 dans le modele des cellules a prolactine. L'internalisation de la sequence carboxy-terminale de rab3a ainsi que celle de rab3b (et non celle de rab1 ou rab2) bloque efficacement l'exocytose regulee de ces cellules. Ceci montre que les proteines rab3 sont impliquees dans le controle de l'exocytose regulee et suggere que, malgre leur divergence, les sequences hypervariables des deux proteines rab3 interagissent avec un meme regulateur specifique. La mise en evidence de l'internalisation d'antphd a suggere un modele ou les proteines a homeodomaine pourraient, en plus de leur fonction en tant que facteurs de transcription, etre des facteurs nucleaires a action paracrine. Nous avons d'abord teste la capacite a traverser les membranes cytoplasmiques. Ajoutee dans le milieu extracellulaire, la proteine hoxa-5 est internalisee et s'accumule dans le noyau des cellules traitees. Les homeoproteines etant depourvues de peptide signal, leur eventuelle secretion ne pourrait se faire que par des voies non conventionnelles. Nos experiences de traduction in vitro et de surexpression dans des fibroblastes suggerent effectivement une interaction entre la proteine hoxa-5 et l'appareil de secretion, laissant ouverte la possibilite d'un role paracrine pour les proteines a homeodomaine