Abstract FR:

L'uracile permease de s. Cerevisiae constitue un objet biologique privilegie pour l'etude de la biogenese et la topologie des permeases de levure: l'expression d'uracile permease active, donc acheminee jusqu'a la membrane plasmique, peut etre amplifiee plus de 100 fois sans perturber la croissance des cellules. Cette propriete a facilite la detection immunologique de l'uracile permease, outil indispensable dans l'etude de sa biogenese. Nous avons identifie la premiere sequence signal permettant l'insertion de l'uracile permease dans la membrane du reticulum endoplasmique. Au cours de son transit par la voie de secretion, l'uracile permease ne subit ni clivage proteolytique, ni n-glycosylation. En revanche, la permease est phosphorylee sur plusieurs residus serine lors de son arrivee a la membrane plasmique. Il s'agit la de la premiere demonstration d'une phosphorylation dans le cas d'une permease chez s. Cerevisiae. L'analyse de la sequence proteique deduite de la sequence du gene fur4 codant pour l'uracile permease montre que cette proteine presente une structure generale caracteristique de toutes les permeases de s. Cerevisiae sequencees a ce jour: une longue extremite n-terminale hydrophile suivie de 10 a 12 segments transmembranaires potentiels, et d'une extremite c-terminale hydrophile. L'accessibilite d'epitopes n- et c-terminaux de la proteine a l'action de proteases agissant in vivo ou in vitro a permis de demontrer l'orientation cytosolique des deux extremites de la proteine. Pour tester l'orientation des boucles hydrophiles de la permease, des mutants ont ete construits par insertion dans ces segments de sites potentiels de glycosylation. Apres translocation in vitro dans des microsomes de pancreas de chien, certaines des proteines mutantes sont glycosylees, ce qui demontre la localisation luminale des boucles correspondantes. L'ensemble des resultats obtenus permet maintenant de proposer un modele selon lequel l'uracile permease presenterait 10 segments transmembranaires