Abstract FR:

Le rgh est une proteine de 620 acides amines (aa) comprenant un domaine transmembranaire unique qui fait partie de la superfamille des recepteurs des cytokines. Ces recepteurs sont caracterises: i) par la presence de residus cysteine conserves et d'un motif wsxws dans leur domaine extracellulaire, ii) par la presence d'une region conservee riche en proline (boite 1) dans la partie juxtamembranaire du domaine cytoplasmique, iii) par l'absence de sequences consensus correspondant a une activite enzymatique connue comme une activite tyrosine kinase. Le principal objectif de notre these a ete l'etude de la transmission du signal de la gh par son recepteur et l'identification des domaines fonctionnels du rgh. La liaison de la gh a son recepteur entraine la dimerisation de celui-ci et l'initiation d'une cascade de phosphorylations sur tyrosines de proteines cellulaires. C'est en 1993 que la tyrosine kinase jak2 associee au rgh a ete identifiee. Il s'agit d'une kinase cytosolique faisant partie de la famille des janus kinases et dont les membres participent a la transmission du signal de l'ensemble des recepteurs des cytokines. Apres activation du rgh, jak2 s'associe au recepteur, s'autophosphoryle et phosphoryle un grand nombre de substrats dont le rgh, les stats (signal transducers and activators of transcription) (stat1, 3 et 5). Les stats sont des facteurs de transcription cytosoliques qui sont recrutes par le complexe recepteur/jak via des interactions tyrosines phosphorylees/sh2, puis sont actives par phosphorylation et transloques dans le noyau ou il participe a l'activation de la transcription. D'autres molecules telles irs-1, les map kinases sont egalement impliquees dans la signalisation du rgh. Afin d'identifier les domaines fonctionnels du rgh, nous avons construit des mutants du rgh (tronques, de deletion, ponctuels) et nous avons etudie leur fonction a l'aide de tests fonctionnels. Les tests que nous avons mis au point concernent des etapes precoces de la signalisation (phosphorylations de jak2, du rgh, de stat 3 et stat5 ; activite enzymatique des map kinases) et des etapes situees plus en aval (transcription de genes repondant a la gh). L'ensemble de nos resultats permet de definir les domaines fonctionnels du rgh suivants: i) la region cytoplasmique proche de la membrane. Cette region contient la boite 1 qui est essentielle a l'association et l'activation de jak2. Tous les effets testes dependent de l'activation prealable de jak2, ainsi il s'agirait de l'etape initiale de la transmission du signal. Cette region amino-terminale est egalement suffisante pour les activations des map kinases et de stat3 par la gh. Differentes observations suggerent que ces activations sont independantes de la presence de tyrosines sur le rgh, l'activation de jak2 pourrait etre suffisante pour ces effets. Ii) la region c-terminale. Cette region est essentielle, en plus de la boite 1, pour l'induction de la transcription d'un gene repondant a la gh (spi 2. 1, serine protease inhibitor). Nous avons identifie stat5 comme etant un des facteurs indispensables a l'activation de cette transcription. La partie carboxyterminale du rgh contient des tyrosines qui sont fortement phosphorylees apres stimulation par la gh. Certaines tyrosines c-terminales du rgh sont essentielles pour le recrutement de stat5 et d'autre molecules telles une phosphatase qui participerait a la dephosphorylation de jak2 et a l'attenuation du signal