Abstract FR:

L'objet de ce travail de these a consiste en la conception et la preparation d'immunogenes recombinants, ainsi que la caracterisation de la reponse humorale par l'administration de ces immunogenes. Les toxines etudiees dans ce cadre sont l'erabutoxine a, une toxine curarisante de venin de serpent, et la toxine diphterique. Dans une premiere partie, plusieurs acides amines impliques dans la toxicite de l'erabutoxine ont ete modifies simultanement par mutagenese dirigee. L'erabutoxine ainsi modifiee a ete produite dans escherichia coli puis purifiee. Les proprietes biochimiques de cette proteine ont ete etudiees. In vitro, l'erabutoxine modifiee ne se fixe pas de maniere detectable sur le recepteur nicotinique de l'acetylcholine, la cible des toxines curarisantes. Lorsqu'elle est administree a des souris balb/c, l'erabutoxine modifiee stimule la synthese d'anticorps seriques qui lient l'erabutoxine sauvage et sont capables de neutraliser sa toxicite in vitro. L'erabutoxine modifiee constitue donc un toxoide d'interet permettant l'induction d'une reponse immunitaire specifique d'une toxine curarisante. Dans la deuxieme partie de ce travail, l'erabutoxine modifiee a ete associee a un vecteur vivant non pathogene, staphylococcus carnosus. Un vecteur navette d'expression a ete utilise a cet effet. Il permet l'exportation d'une proteine heterologue et son ancrage dans l'enveloppe bacterique. Des souris balb/c ont ete immunisees avec s. Carnosus presentant a sa surface l'erabutoxine modifiee. Vis a vis de l'erabutoxine a, seule une reponse humorale tres limitee a ete observee. Un fragment non toxique de la toxine diphterique, le domaine de liaison de la toxine diphterique a un recepteur cellulaire, a egalement ete produit par s. Carnosus a l'aide du vecteur decrit precedemment. L'immunisation de soris balb/c avec s. Carnosus produisant ce domaine proteique stimule une reponse humorale pecifique de la toxine diphterique. De plus, les serums immuns neutralisent in vitro la cytotoxicite de la toxine diphterique.