Abstract FR:

La toxine-alpha de clostridium perfringens, principal facteur de virulence produit par les souches pathogenes, joue un role preponderant dans le developpement de la gangrene gazeuse. Phospholipase c, elle peut hydrolyser la phosphatidylcholine (lecithine) et la sphingomyeline, acides gras majeurs des membranes des cellules eucaryotes. Elle est aussi letale, necrosante et hemolytique. Bien caracterisee biochimiquement, les relations existant entre la structure et le mode d'action de la toxine alpha sont encore imprecises. Grace a la remarquable similitude existant entre les 2/3 n-terminaux de la toxine-alpha et la phospholipase c de bacillus cereus (pc-plc) bien decrite structuralement, nous avons determine la position du site catalytique dans la region n-terminale de la toxine alpha. Par mutagenese dirigee, nous avons identife les residus qui composent son site actif et qui sont tous conserves dans la pc-plc : residus histidine impliques dans la coordination avec les atomes de zinc, residus acides (asp et glu) constituant la partie chargee du site actif et residus aliphatiques necessaires pour sa structure. De plus, grace au variant asp56asn completement inactif, nous avons montre que l'activite phospholipasique etait responsable de la letalite due a la toxine-alpha. Pour determiner le role du domaine c-terminal de 120 acides amines completement depourvu d'activite enzymatique in vitro, nous avons examine les residus tyrosine indispensables pour l'interaction avec les membranes cellulaires et la reconnaissance du phospholipide. De plus, un site de fixation a faible affinite pour le calcium, cation necessaire a l'activite de la toxine-alpha, a aussi ete caracterise au niveau de residus aspartate de la partie c-terminale. Le calcium interviendrait dans l'interface entre la proteine et les membranes cellulaires.