Abstract FR:

Le sujet de cette these est l'etude de l'assemblage et de la secretion des lipoproteines contenant apob-100, dans les cellules hepg2. Dans une premiere partie, nous avons module la masse des lipides intracellulaires par un pretraitement avec des inhibiteurs d'enzymes, impliquees dans leurs voies de synthese (simvastatine/cholesterol, 58-035/cholesteryl ester, tofa/triglyceride) ou par l'acide oleique. Nous avons egalement module la neosynthese lipidique simultanement a la mesure de la secretion d'apob-100. L'ensemble de ces experiences montre que ni la masse de triglycerides ou d'esters de cholesterol, ni la neosynthese de cholesterol ou d'esters de cholesterol ne regule la secretion d'apob-100. Par contre, la neosynthese des triglycerides est positivement correlee avec la secretion d'apob-100. Dans une deuxieme partie, grace a une technique d'analyse miniaturisee que nous avons mise au point, nous avons montre que l'acide oleique, en augmentant la neosynthese des triglycerides, stimule la secretion d'apob-100 particulierement sous la forme de vldl riches en triglycerides. La troisieme partie de ce travail decrit l'effet d'un inhibiteur specifique de la mtp (microsomal triglyceride transfer protein), la bmmq. Cette molecule inhibe selectivement la production d'apob-100 et genere des lipoproteines proportionnellement appauvries en triglycerides, et enrichies en cholesterol. L'utilisation de la puromycine pour generer des formes tronquees du cote c-terminal nous a permis de montrer que les formes tronquees les plus petites n'etaient pas affectees par un inhibiteur de mtp, bien que secretees sous forme de lipoproteines. Seules les formes tronquees plus grandes que 58% d'apob-100 sont sensibles a la bmmq, ce qui suggere l'existence de sequences determinant l'assemblage avec les triglycerides medie par la mtp. La derniere partie de notre etude, utilisant le 25-hydroxycholesterol, suggere qu'il existe egalement une autre voie de regulation de la secretion d'apob-100, ne faisant pas intervenir l'apport de triglycerides par la mtp. Nous decrivons un modele hypothetique tenant compte de l'ensemble de nos resultats experimentaux, et qui consiste en plusieurs etapes sequentielles de lipidation d'apob-100