Abstract FR:

Afin de progresser dans la caracterisation des recepteurs de l'acide abscissique (aba), nous avons adopte une approche biochimique de detection et de purification de proteines affines de l'aba, fondee sur l'utilisation de sondes d'affinite: anticorps anti-idiotypiques et conjuges aba-proteines. Les anticorps anti-idiotypiques de l'aba ont ete developpes a partir d'anticorps monoclonaux anti-aba, purifies et modifies chimiquement afin d'en augmenter l'immunogenicite. Utilise dans un test elisa, l'un des anticorps obtenus s'associe specifiquement a des structures proteiques appartenant a la fraction microsomale chez brassica napus. En western blot, cet anticorps revele deux bandes polypeptidiques, dont une majeure de 17kda. Cependant, ces travaux n'ont pu etre poursuivis, le developpement d'anticorps monoclonaux s'etant heurte a l'obstacle de la fusion cellulaire. Les conjugues aba-proteines, synthetises par un couplage chimique utilisant la fonction cetone en c4' ou carboxylique en c1 de l'aba sur une proteine porteuse (bsa et ova), confirment la presence de structures proteiques affines au sein de la fraction microsomale, chez brassica napus et arabidopsis thaliana. L'interaction conjugues/proteines microsomales est specifiquement associee au couplage de l'aba sur les proteines porteuses et est independante de la nature de la proteine porteuse ou du couplage chimique utilise (c1/c4'). Cette interaction est sensible a des traitements proteolytiques et thermiques de la fraction microsomale, confirmant la nature proteique des sites d'interaction. Par ailleurs, des experiences de deplacement competitif de la fixation des conjugues en elisa montrent que ces sites sont presents en nombre limite et sont saturables. La solubilisation de ces sites proteiques par un detergent (chaps) ne modifie pas sensiblement l'interaction conjugues/proteines microsomales solubilisees. Des experiences preliminaires de purification proteique (filtration sur gel, chromatographie echangeuse d'ions) ont montre que ces sites d'interaction etaient restreints a un nombre limite de fractions proteiques. Cependant, a ce stade de nos travaux, il n'est pas encore etabli que ces structures proteiques correspondent a des recepteurs de l'aba