Abstract FR:

L'udp-n-acetylmuramoyl-l-alanine:d-glutamate ligase (murd) est une enzyme cytoplasmique de la voie de biosynthese du peptidoglycane, polymere essentiel de la paroi bacterienne. Elle catalyse la formation d'une liaison peptidique entre l'udp-murnac-l-ala et l'acide d-glutamique, avec hydrolyse concomitante d'atp. Comme toutes les enzymes de cette voie, elle est une cible potentielle pour de nouveaux antibacteriens. Apres purification de l'enzyme a partir d'une souche surproductive de escherichia coli, les residus d'acides-amines essentiels ont ete recherches en utilisant des reactifs specifiques et en effectuant des mutageneses dirigees. Un residu cysteinyle appartenant au site actif de l'enzyme a ete localise, ainsi qu'un residu lysyle. L'etude du mecanisme reactionnel a egalement ete aborde par differentes voies. La reaction d'echange isotopique moleculaire, au cours de laquelle le d-glu de l'udp-murnac-l-ala-d-glu est remplace par du d-#1#4cglu, ne peut se faire qu'en presence de phosphate, et n'est pas strictement dependante de la presence d'adp. De plus, l'intermediaire acyl-phosphate suppose a ete mis en evidence par chromatographie sur couche mince, avec utilisation de -#3#2patp ou d'udp-murnac-l-#1#4cala. Un analogue synthetique de l'etat de transition tetraedrique suppose de la reaction s'est revele excellent inhibiteur: cela suggere fortement que cet intermediaire succede a l'acyl-phosphate dans le chemin reactionnel. L'inactivation chromosomique du gene murd codant pour cet enzyme a ete tentee en vain, ce qui a mis en evidence la probable co-transcription des genes distaux