Abstract FR:

Les potentialites de la levure kluyveromyces marxianus pour exprimer des proteines heterologues ont ete examinees a l'aide des outils genetiques developpes dans cette etude. Pour ce faire, des fragments d'adn contenant des sequences ars et des centromeres specifiques de cette souche ont ete isolees. Les sequences ars fonctionnent aussi chez kluyveromyces lactis mais tres mal chez saccharomyces cerevisiae malgre une sequence consensus bien conservee. Les centromeres isoles ont des sequences bordantes cdei et cdeii tres voisines des autres especes, mais la longueur de la sequence centrale est semblable a celle de kluyveromyces lactis. Un vecteur multicopie et un vecteur centromerique ont ete construits en utilisant ces sequences. Des promoteurs de genes de kluyveromyces marxianus ont ete isoles en utilisant le gene gus (-glucuronidase) comme gene repporteur. Un de ces promoteurs, g3, possede une tres bonne efficacite. Il dirige un gene presentant une identite avec une permease de purine-cytosine de saccharomyces cerevisiae. L'expression chez kluyveromyces marxianus de deux proteines heterologues, la prochymosine de veau et la streptokinase de streptococcus pyogenes, associees ou non avec les sequences signal de l'inulinase ou de la toxine killer a ete etudiee en utilisant les promoteurs g3, adh1, hsp70 de kluyveromyces marxianus et pgk et hsp26 de saccharomyces cerevisiae. La streptokinase est synthetisee mais aucune secretion de la proteine n'a pu etre mise en evidence. La prochymosine est synthetisee et secretee a des niveaux semblables a ceux obtenus chez kluyveromyces lactis, ce qui montre que kluyveromyces marxianus est un organisme de choix pour la production de proteines heterologues