Les glycoproteines riches en hydroxyproline de la paroi cellulaire vegetale : etude biochimique, activite biologique et aspects biotechnologiques
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Toulouse 3Disciplines:
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Les glycoproteines riches en hydroxyproline (hrgps), encore appelees extensines, sont des molecules structurales presentes dans la paroi primaire des vegetaux superieurs, qui s'accumulent fortement en reponse a de nombreux facteurs environnementaux et participent a la defense des plantes contre les microorganismes. Elles sont caracterisees par la repetition du pentapeptide ser-(hyp)#4 glycosyle par le galactose (ser-gal) et des oligoarabinosides (hyp-ara#n). Leur richesse en hydroxyproline, acide amine rare dans les proteines, les rapproche du collagene. Pour cette raison, les hrgps ont un interet certain en biotechnologies, dans les domaines reposant traditionnellement sur l'utilisation du collagene. Les resultats exposes dans le memoire concernent des aspects appliques et fondamentaux de ces glycoproteines vegetales. C'est ainsi que nous avons developpe une methode de preparation de fractions enrichies en hrgps, transposable industriellement. En l'etat actuel, on peut envisager de passer de l'etape pilote au stade industriel. Les hrgps presentent un degre de glycosylation variant selon le vegetal, le type cellulaire considere et l'environnement. Les arabinosides a hydroxyproline hyp-(ara)#n sont des marqueurs specifiques des hrgps. Une methode rapide et tres sensible de preparation d'oligoarabinosides standards a ete mise au point : ces composes obtenus par hydrolyse alcaline sont separes, purifies et quantifies par hpaec-pad. Cette methode a permis d'utiliser ces composes comme marqueurs chimiotaxonomiques, de mettre en evidence et de caracteriser par rmn du proton et du carbone un nouvel arabinoside de degre de polymerisation non encore decrit jusqu'ici : hyp-(ara)#5. Parallelement a la mise au point de ces techniques, des bioessais ont ete realises afin de reveler des effets biologiques des hrgps et des hyp-ara sur la croissance de microorganismes : bacterie symbiotique et champignon endomycorhizien. Les hrgps solubles inhibent de facon reversible la croissance de ces microorganismes. Ces resultats suggerent que les hrgps, proteines de defense, interviennent par leur nature polycationique dans l'interaction. La maitrise d'une methodologie industrielle et notre capacite a caracteriser par des techniques fines les hrgps, sont autant d'apports permettant desormais l'etude de ces glycoproteines au plan fondamental et leur exploitation au plan applique.