Purification, immunocaracterisation et biosynthese d'une flavoproteine membranaire vegetale : la nadh ferricyanure reductase
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Paris 6Disciplines:
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La nadh ferricyanure reductase est une flavoproteine membranaire impliquee notamment dans la desaturation de l'acide oleique en acide linoleique. L'enzyme a ete solubilisee, puis purifiee a partir de microsomes de tubercules de pomme de terre (solanum tuberosum l. , var. Bintje). L'electrophorese sur gel sds-page revele une bande proteique homogene d'une masse moleculaire de 44 kda. Les proprietes spectrales du groupe prostherique assoce a la proteine sont caracteristiques des flavoproteines. Le contenu en flavine est de 0,8 mole par mole de proteine. Les constantes de michaelis determinees pour le nadh et le ferricyanure de potassium sont respectivement de 35 m et 78 m. Des anticorps anti-nadh ferricyanure reductase ont permis de mettre en evidence des reactions croisees entre la reductase de tubercules de pomme de terre et certaines de ses homologues vegetales. La presence d'une proteine similaire a la reductase microsomale a egalement ete detectee au niveau du plasmalemme. L'etude de la biosynthese de la nadh ferricyanure reductase, in vivo et in vitro, a montre que la proteine etait synthetisee sur les polysomes libres sans modifications co- ou post-traductionnelles apparentes. L'ensemble de ces donnees biochimiques ainsi que leur comparaison avec celles relatives a la nadh cytochrome b#5 reductase animale ont ainsi permis d'affirmer que la nadh ferricyanure reductase des microsomes de tubercules de pomme de terre correspondant bien a une nadh cytochrome b#5 reductase