Le Polyoside capsulaire de type 5 de Staphyloccus aureus et la prévention vaccinale ees infections mammaires de la vache : purification, production et immunogénicité
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Abstract EN:
Staphylococcus aureus is a major cause of intrammmary infections of dairy cattle and the resulting economic losses fully justify the development of a vaccine for the prevention. Most S. Aureus isolates from bovine mammary infections produce capsular polysaccharides that belong to two serotypes, 5 and 8. Considering the antiphagocytic properties of capsules, they could be a potential composnent of such a vaccine. This thesis reports studies on the type 5 capsular polysaccharide, which is expressed by about 50% of S. Aureus bovine isolates. A new simple and efficient purification method was developed. The production of the type 5 capsular polysaccharide by S. Aureus was measured by ELISA, using different media and culture conditions. This production remained low in complex media and is improved in a synthetic medium : purified type 5 polysaccharide is not immunogenic in cows but immunization with purified type 5 polysaccharide-carrier protein conjugate entails both antibody response against the polysaccharide and carrier-specific recruitment of somatic cells in milk. In vitro phagocytosis assays suggest that type 5 specific antibodies could enhance S. Aureus opsonization, particularly in presence of limited amount of complement components.
Abstract FR:
Staphylococcus aureus est l'une des espèces bactériennes majeures responsables d'infections mammaires de la vache laitière. Or, les mammites constituent la pathologie la plus importante pour ces animaux. Il n'existe pas de prévention vacccinale efficace vis-à-vis de ces infections. La polyoside capsulaire de type 5 de S. Aureus est exprimé par plus de 50% des souches impliquées dans les mammites. Compte tenu du rôle antiphagocytaire habituellement rapporté pour ces structures de surface et de l'importance de la phacocytose dans la défense de la mammelle, il apparait comme un constituant potentiel d'un futur vaccin. Une nouvelle technique de purification de polyoside de type 5, simple et d'un rendement élevé, a été mise au point. Les milieux de culture complexes classiquement utilisés pour les staphylocoques ne se sont pas révélés favorables pour la production du polyoside 5. Aussi, celle-ci a été étudiée dans un milieu synthétique à base de glucose ou de lactose comme source de carbone. Le milieu synthétique à base de glucose nous a permis d'obtenir une production 15 fois supérieure à celle rapportée dans la littérature. Le polyoside de type 5 est immunogène chez la vache lorsqu'il est couplé à une protéiine porteuse. Cette protéine provoque, après vaccination par voie générale, un état d'hypersensibilité locale conduisant à un recrutement précoce et massif de polynucléaires dans la mammelle. Les tests de phagocytose réalisés suggèrent que les anticorps spécifiques dirigés contre le polyoside 5 pourraient, en coopération avec d'autres composants sériques et en présence de faible quantité de complément, renforcer l'opsonisation de S. Aureus.