Abstract FR:

Nous nous interessons aux effets du fibroblast growth factor basique (fgfb) sur la differenciation des neurones de l'hippocampe en culture et a certains des mecanismes moleculaires qui pourraient contribuer a cette differenciation. Dans ce contexte, nous avons etudie les effets a court terme du fgfb (quelques minutes a quelques heures), notamment sur certaines voies de transduction de signal. Nous nous sommes interesses egalement aux effets a plus long terme du fgfb (plusieurs jours) sur l'extension neuritique et sur la regulation de genes codant pour des proteines du cytosquelette ou pour des neurotrophines. Principaux resultats dans la perspective d'un travail moleculaire sur des cultures primaires de neurones de l'hippocampe embryonnaire, j'ai contribue a la mise au point d'un protocole associant la reverse-transcription et la pcr, afin d'etudier au sein de multiples echantillons de neurones soumis a des conditions diverses de culture, l'expression relative de nombreux genes (article soumis). A l'aide de ces techniques, j'ai etudie les effets du fgfb sur l'expression de genes codant pour des facteurs de transcription dans des neurones de l'hippocampe en culture et j'ai analyse certaines des voies de transduction de signal impliquees (article publie). J'ai mis en evidence au cours du developpement neuronal in vivo (et in vitro sous l'effet du fgfb) un arn messager codant pour une nouvelle isoforme de map2 ; celle-ci a ete clonee, caracterisee et sa structure a ete analysee. J'ai egalement etudie l'expression de cette nouvelle variante au cours du developpement du snc in vivo et in vitro (trois articles dont deux publies et un sous presse). J'ai etudie la regulation de l'expression de genes codant pour des facteurs de croissance et des proteines du cytosquelette ( et tubuline, spectrine, map2, tau et neurofilaments) dans des cultures de neurones de l'hippocampe, sous l'effet du fgfb (articles en preparation). Programme de recherche 1) il est clair que diverses conditions de cultures (substrats divers, facteurs neurotrophiques divers) modulent la morphologie et donc la differenciation des neurones de l'hippocampe en culture. Il existe des marqueurs specifiques des compartiments axonaux et dendritiques des neurones, parmi lesquels ceux que nous avons caracterise de maniere exhaustive (isoformes de tau et de map2 respectivement). Nous avons des evidences qui suggerent que seulement certaines conditions de cultures permettent une expression de ces variantes selon un programme similaire a celui observe dans l'hippocampe in vivo. Notre but est de poursuivre la caracterisation des conditions minimales et des facteurs necessaires a la regulation de chacun de ces marqueurs et donc a la differenciation partielle de ces compartiments neuronaux. 2) nous avons aussi pour projet de poursuivre la caracterisation de map2d et l'etude de sa localisation intracerebrale et cellulaire. Nous preparons actuellement des anticorps diriges contre cette variante qui seront les seuls anticorps specifiques des petites map2. Ceux-ci nous permettront de determiner la localisation cellulaire et intracellulaire de map2d. Nous avons egalement realise les constructions geniques necessaires a la transfection et a l'expression de map2c et map2d dans des cellules non neuronales. Nous projetons de comparer a l'aide d'anticorps diriges contre la tubuline et map2, l'organisation des microtubules en presence de map2c (deja decrite) ou de map2d que nous avons clone. Finalement, nous projetons d'analyser in vitro certaines des caracteristiques dynamiques de map2d dans la polymerisation, l'assemblage des microtubules et leur stabilisation