Abstract FR:

L'objectif de ce travail de these a ete la caracterisation moleculaire et fonctionnelle de canaux anioniques de plantes. Nous avons choisi de rechercher, chez le tabac et arabidopsis, des homologues des proteines de la famille clc, decrites chez les animaux comme des canaux chlorure dependant du voltage. Deux adnc de tabac ont ete isoles par une approche pcr. L'analyse de la sequence des deux proteines correspondant a ces deux adnc montre qu'elles possedent des motifs propres aux proteines de type clc et un profil d'hydrophobicite suggerant la presence de 10 a 12 domaines transmembranaires. Les deux proteines de tabac ont ete appelees clc-nt1 et clc-nt2. La caracterisation fonctionnelle des deux clc de tabac a ete realisee apres expression heterologue en ovocyte de xenope. Cette etude a montre que les deux proteines induisent des courants anioniques s'activant lentement au cours du temps a la suite d'une hyperpolarisation de la membrane a des potentiels inferieurs a 150 mv. Des anticorps polyclonaux specifiquement diriges contre les proteines clc-nt1 et clc-nt2 ont ete prepares. La localisation cellulaire des deux proteines a ete recherchee en utilisant des fractions membranaires purifiees et par une etude d'immunocytochimie. Cette etude a montre que les proteines clc-nt1 et clc-nt2 sont tres probablement localisees dans la membrane interne des mitochondries. En vue d'elucider la fonction cellulaire des clc, nos efforts ont porte d'une part sur l'obtention de materiels alteres dans l'expression des genes clc et d'autre part sur la mesure du transport d'anions au niveau de mitochondries isolees a partir de ces materiels. Toutefois, aucun systeme ne nous a permis de concilier des approches fonctionnelles et genetiques. Neanmoins, les donnees sur les canaux anioniques mitochondriaux en relation avec la physiologie mitochondriale, nous ont conduit a proposer trois hypotheses principales quant a la fonction des clc dans la mitochondrie.