Abstract FR:

La degradation de la spectrine erythrocytaire au cours du cycle du plasmodium, agent du paludisme, a ete decrite chez plusieurs especes. Elle interviendrait dans le processus de liberation des merozoites, mais a ce jour, peu de proteases parasitaires agissant sur la spectrine ont ete decrites (pb37, pf37, pl37). La presence de proteases capable d'hydrolyser la spectrine humaine purifiee a ete systematiquement recherchee dans les fractions biochimiques des extraits cytosolubles de 100. 000g provenant de schizontes de p. Falciparum. Une activite proteolytique acide (ph5), inhibee par 20m de pepstatine a a ainsi ete mise en evidence. Elle genere majoritairement trois fragments (170, 150 et 125 kda) a partir de la sous-unite de la spectrine (240 kda). L'immunomarquage de ces fragments, a l'aide d'anticorps specifiques des differents domaines tryptiques de la sous-unite , a revele que l'hydrolyse se situait dans la region du motif sh3 de la molecule. L'utilisation de peptides recombinants contenant divers segments de la chaine a permis de demontrer que le motif sh3 etait la cible de cette activite spectrinase. La spectrometrie de masse (maldi-tof-ms) a permis l'identification de six sites de clivage, distribues sur trois regions de la sequence en acides amines du motif sh3. Le fait que l'activite spectrinase soit maximum a ph acide a conduit a rechercher la presence d'enzymes de la vacuole digestive (hemoglobinases) dans la fraction active contre le sh3. A l'aide d'anticorps anti-plasmepsine ii, il a ete montre que celle-ci etait presente dans les fractions biochimiques enrichies en activite spectrinase. L'hydrolyse a ph5 du motif sh3 par la plasmepsine ii recombinante, suivie de l'analyse par maldi-tof-ms des fragments generes, a revele que l'enzyme etait principalement responsable de l'activite spectrinase. De plus, nous avons montre que la plasmepsime ii recombinante, a ph6. 8, etait capable d'hydrolyser la spectrine, purifiee ou associee aux membranes plasmiques de l'hematie.