Abstract FR:

Il est apparu interessant, au moment ou la genetique moleculaire des corynebacteries se developpait, d'explorer leurs potentialites pour la secretion de proteines heterologues. Deux proteines secretees majoritairement ps1, ps2, avaient ete identifiees chez corynebacterium glutamicum et leurs genes de structure csp1 et cspb avaient ete clones et sequences. Des sequences signal, localisees aux extremites nh2-terminales de chacune des sequences proteiques deduites des sequences des genes correspondants, avaient ete decrites. Des experiences de deletion dans le gene csp1 conduisant a des raccourcissements de la proteine ps1 du cote cooh ont permis de confirmer l'importance de l'extremite nh2 pour la secretion de la proteine. Ces deletions ont permis en outre de construire des vecteurs d'expression/secretion dont le pcgl1030. Sur la base de ces resultats un vecteur d'expression/secretion a ete construit a partir du gene cspb, le pcgl847. Ces differents vecteurs ont ete valides a l'aide de differents genes reporteurs: cela (endoglucanase a) de clostridium thermocellum, bla(beta-lactamase) de e. Coli, et aml(alpha-amylase) de streptomyces limosus. De plus, le vecteur pcgl1030 a ete utilise pour secreter des polypeptides artificiels a sequence repetee. L'analyse comparative de la sequence proteique deduite du gene csp1 avec les sequences contenues dans les banques de donnees avait permis de mettre en evidence une forte similarite entre la proteine ps1 et les proteines du complexe antigenique 85 des mycobacteries. En collaboration avec l'institut pasteur (bruxelles), nous avons cherche a produire et faire secreter par c. Glutamicum les composants de l'antigene de m. Tuberculosis en utilisant le vecteur d'expression/secretion, pcgl847. Nous avons montre que les antigenes produits par c. Glutamicum etaient immunologiquement actifs et stimulaient la secretion de l'interleukine-2 et de l'interferon gamma. Ce travail a permis de montrer aussi que ces trois composants du complexe antigenique 85 possedent des activites de stimulation differente