Abstract FR:

La these a porte sur la conception et la mise au point d'un procede economique d'extraction de la chromatine (adn + histones) puis de purification de l'adn a partir du sang de volaille, une agro-ressource 400 fois plus riche en ces biomolecules que le sang de betail. En vue d'un transfert industriel, les methodes physiques de separation generalement moins onereuses et polluantes que celles qui recourent a des reactions chimiques ont ete privilegiees. L'extraction de la chromatine comporte 7 etapes qui font surtout appel aux techniques physiques de separation : centrifugation, homogeneisation, filtration tangentielle, osmose en milieu aqueux, dialyse, sechage ou encore lyophilisation et se limite a des traitements chimiques simples : recours a des sels anticoagulants et a des detergents hemolytiques. Ce faisant, les consommables de cout eleve habituellement impliques dans la separation de petites quantites de chromatine ont ete ecartes. D'ores et deja, les travaux d'optimisation de ce procede d'extraction et les premiers essais de transfert a l'echelle quart de grand ont permis de valider la grande majorite des etapes de la demarche en vue de la realisation d'un pilote. La purification de l'adn a partir de la chromatine comporte 4 etapes dont une etape de chromatographie en phase liquide en presence d'enzymes immobilisees sur support solide. En procedant de la sorte, on reduit de facon substantielle la consommation d'un agent couteux, la proteinase k, indispensable a la purification de l'adn. Independamment de leur faible cout au regard des methodes conventionnelles, l'extraction de la chromatine puis la purification de l'adn que nous proposons offrent l'avantage d'etre transferables a l'echelle industrielle sans generer de charge polluante inacceptable au regard de la legislation. De surcroit, la purete des actifs obtenus est superieure a celle des produits qui sont actuellement commercialises.