Abstract FR:

Ce travail de these porte sur la mise au point d'un protocole experimental permettant d'acceder a l'etude moleculaire de l'interaction d'agents exogenes au niveau de la cellule vivante unique. Dans ce but, un microspectrometre fonctionnant dans les domaines visible et ultraviolet a ete concu et mis au point au laboratoire: il nous permet d'effectuer l'analyse spectrale de l'emission de fluorescence et de la diffusion raman d'un chromophore en provenance d'un microvolume subcellulaire. L'etude detaillee des caracteristiques techniques du dispositif et de ses performances experimentales permet de definir precisement le domaine d'application et les limites experimentales de cette approche en biophysique moleculaire (sensibilite, resolution spatiale, resolution temporelle, etc. ). Nous avons ainsi pu etudier les differentes etapes du processus de detoxification cellulaire d'un agent exogene: les caracteristiques cinetiques des processus de penetration cellulaire et d'activation metabolique du b(a)p ont ete determinees par microspectrofluorimetrie au niveau d'une cellule vivante isolee (lignee t47-d). Les resultats obtenus montrent: 1) que l'incorporation du b(a)p s'effectue suivant un mecanisme de diffusion passive a travers la membrane cytosplasmique, 2) qu'il existe une etape prealable d'induction de la synthese du cytochrome p#1450 par le b(a)p qui permet de rendre compte du taux eleve de metabolisation observe sur cette lignee cellulaire