Abstract FR:

Le projet de sequencage systematique du genome de la levure saccharomyces cerevisiae a demarre en 1989. C'est dans le cadre de ce projet europeen que notre laboratoire a participe au sequencage d'un fragment de 43 kb du chromosome ii. Pour ma part, j'ai contribue au sequencage de 2 fragments contigus de 6 kb et 12,5 kb (faisant partie du fragment de 43 kb). Au cours de ces 2 projets, des strategies differentes ont ete employees. Nous avons montre qu'il est preferable d'utiliser une methode de digestion avec la dnasei pour generer des fragments aleatoires, et de sequencer a partir des deux extremites des inserts plasmidiques plutot que de realiser des digestions partielles avec des enzymes de restriction et de cloner les fragments aleatoires obtenus dans des vecteurs simple-brin. Dans un deuxieme temps, la sequence du fragment de 43 kb du chromosome ii a ete analysee. Celle-ci presente 23 orfs parmi lesquelles, 10 correspondent a des genes connus, 8 presentent des similitudes avec des proteines des banques de donnees et 5 correspondent a de nouvelles orfs putatives. Nous avons detecte plusieurs genes connus, sup46 et urp1 (proteines ribosomales), rim2 (replication in mitochondria), msi1 (multicopy suppressor of ira1), pgi1 (phosphoglucoisomerase), bem1 (bud emergency), dur1,2 (uree amidolyase), ybr1307 (suppresseur d'afg3), ytaf#i#i90 (tata-binding protein associating factor) et cdc47 (implique dans l'initiation de la replication d'adn). Parmi les autres orfs, certaines presentent des similitudes avec des proteines connues, ce qui permet d'emettre des hypotheses sur leurs fonctions: ybr1445 et ybr14411 (mannosyltransferases putatives), ybr1245 (facteur de transcription putatif), ybr1444 (lipase peroxysomale putative). Parmi toutes ces orfs, 6 d'entre d'elles ont ete deletees. Pour ybr1403 et ybr1410, nous avons montre que leurs deletions entrainent un phenotype de letalite. Pour la souche deletee pour ybr1405 (msi1), nous avons analyse les arn#ms des genes impliques dans la cascade ampc. Nous avons ainsi montre que msi1 n'est pas implique dans la regulation transcriptionnelle de ces genes